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液相色谱（LC）
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主题：高效液相色谱梯度洗脱

浏览0 回复7 电梯直达
胖胖辉
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发表于：2016/12/21 11:20:23 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
悬赏金额：20积分 状态： 未解决
我是使用液相色谱的菜鸟，现在遇到了一点点问题，请各位前辈解答。两个样品用高效液相色谱测定，一个的条件是：甲醇：ph3缓冲液=75：25，在10分钟左右出峰，流速1ml/min；另一个的条件是：甲醇：ph3缓冲液=5:95，在6分钟左右出峰，流速0.5ml/min，如果我想同时测定，可以用梯度洗脱吗？如果可以的话，流动相比例过程中的变化改怎么设置，请各位大神赐教，谢谢。
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夏天的雪
bingwang228
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2016/12/21 11:51:42 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
您可以先设置等流速的条件测定，两个组份不一定要用梯度，如果要设置梯度可以依据等度条件再优化
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浪淘沙隐
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2016/12/21 16:07:47 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你第二个物质，使用0.5ml/min的流速依然掩盖不了基本无保留的事实，其容量因子顶多为3。能不能用同一个方法检测，还需要看你检测的目的，如果是检测残留，那么可以试试，如果是检测纯度，那就肯定不行。
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sdlzkw007
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2016/12/22 14:34:56 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
同时测定，可以用梯度洗脱,如果原来使用相同的色谱柱。建议使用第二个条件作为初始流动相，在3分钟开始甲醇由5%变化至10分钟95%，然后保持至第二个组分流出。如果中间相差太多时间，可以同时把流速提高至1.2ml/min；个人观点，仅供参考
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太极鱼
huangdong413
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2016/12/22 16:47:38 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这两个样品极性相差太大了，要想在一个条件下检测，要考虑的方面很多，包括物质的pKa，结构式中的极性等，最麻烦的是第二个条件下，极性太大，出峰太快，基本无保留，这时候就要在流动相的pH值和柱子选择上多考虑了，而不是首先想到用梯度方法来分离。方法开发是比较复杂的，需要用到很多方面的知识，还有经验，一两句话说不清楚的。
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浪淘沙隐
zhoujin83
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2016/12/22 17:13:58 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
方法开发一定要知道待测物结构，否则就是无头苍蝇。
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于祥勇
v3251390
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2017/7/19 8:08:43 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
设置一个大梯度先跑一针，看看结果图，再调整梯度不就可以了吗
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有水有渝
xky0230699
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2017/7/19 11:21:19 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
两个的保留差距太大，很难在同一梯度下，保证基线漂移时能比等度分开检测更高效。
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