主题：【第十一届原创】[生活中的仪器分析]餐饮食品自制红糖馒头中甜蜜素的确证实验

                                            餐饮食品自制红糖馒头中甜蜜素的确证实验
最近我们都再开展餐饮食品的监督抽检，餐饮中自制的问题食品还真的不少啊，本文将讲述市场上再普通不过的大众消费食品：红糖馒头中居然普通存在违规添加甜蜜素的现象。
方法：GB 5009.97-2016 第一法及第三法，用气相第一法检出阳性后，需用液质第三法进行确证并进行方法间的比较。
GB 5009.97-2016 第一法气相色谱法：
仪器条件：仪器：岛津GC2010plus 
检测器：FID  进样量：1 μL  柱流量：1.0mL/min  分流比：30:1 ；色谱柱：RTX-1301  30m×320μm×0.25μm    ；进样口温度：150℃    检测器温度：250℃  尾吹气： 20mL/min；氢气流量：50 mL/min  空气流量：350 mL/min；炉温：70℃（3min）再以 40℃/min 升至 220℃(2min)。
样品前处理：称取5.0g试样于50mL塑料离心管中，加15mL纯水，用均质机15000 r/min均质30s，转入50mL比色管中，再用20mL纯水于原塑料离心管中，清洗均质头，合并洗液于50mL比色管中，分别加入2.5mL亚铁氰化钾溶液（106 g/L）和2.5 mL乙酸锌溶液（220 g/L），用纯水定容至50mL。混匀，再转入原50mL塑料离心管中，3800 r/min离心5 min，将上清液完全用定性滤纸过滤，滤液备用。准确移取10mL样液于50mL塑料离心管，置冰浴中。
测定：在样液中依次加入2.5mL亚硝酸钠溶液（50g/L）、2.5mL硫酸溶液（100g/L），摇匀，在冰浴中放置30min，并经常摇动，然后准确加入5mL正庚烷（色谱纯）、2~3g 氯化钠，摇匀后置漩涡混合器上振动1min（或振摇80次），离心静置分层后吸取上层正庚烷层上机测试。
实验原理：在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸钠反应，是先生成环己醇再生成环己醇亚硝酸酯，该反应是可逆反应，冰浴在短时间内可以使逆反应的速率降至较低水平，较为稳定。数据表明即使将上机液拿去冷冻，12小时后环己醇峰的峰面积明显变大。（出来的谱图有有两个峰，前一个峰为环己醇亚硝酸酯，后一个小峰为环己醇峰。）
工作曲线系列标液配制及工作曲线、甜蜜素标液衍生后色谱图（配制好后的标液各取10mL与样品一样衍生）：

空白色谱图：

红糖样品色谱图：

复测：同样进行衍生后得甜蜜素浓度为0.059mg/mL，因此用气相色谱法得出该红糖馒头中添加甜蜜素含量为（0.067+0.059）*50/5=0.6g/kg
GB5009.97-2016第三法液质法进行确证实验
仪器：Agilent  1200  6410B  LCMSMS
仪器条件：正、负离子分别监测

工作曲线系列使用液配制及工作曲线：

100ng/mL甜蜜素标液负离子模式下MRM图：

红糖馒头处理后的样液用水稀释250倍后经负离子模式检测所得的MRM图如下：

100ng/mL甜蜜素标液178与80.1的离子碎片丰度比：5285*100/8180=65%；
红糖馒头处理稀释后的样液甜蜜素178与80.1的离子碎片丰度比：5292*100/7537=70%；
与标液相吻合，故红糖馒头中甜蜜素含量为：98.61*250*50*10-6/1=1.23g/kg（与气相色谱法相比较，含量为气相的2倍，因此液质法不适用于这种高含量的样品甜蜜素的检测，因为液质法的检测限低，灵敏度高，过度稀释后容易产生稀释过程所产生的误差）
红糖馒头处理后的样液用水稀释250倍后经正离子模式检测所得的MRM图如下：

正离子MRM模式下红糖馒头中甜蜜素含量为：92.89*250*50*10-6/1=1.16g/kg（与用负离子模式MRM测定结果相当，与气相色谱法相比较，含量为气相的2倍，因此液质法不适用于这种高含量的样品甜蜜素的检测，因为液质法的检测限低，灵敏度高，过度稀释后容易产生稀释过程所产生的误差）
结论：检测过程中如果是用色谱法检出阳性的样品时，最好能换用质谱法进行确证，但是遇到高含量的样品时，由于质谱法灵敏度高，只能作为辅助定性来使用，因为过度稀释所产生的误差会被放大的，定量还是使用气相色谱法更为准确。另个餐饮食品中违规使用各种添加剂的现象还是比较严重的，监管部门要加大力度进行监管。