主题:【已应助】色谱峰前沿

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lumanman
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寒假前做了一段时间生物样品,年前柱子一切正常,峰形也挺好,想着放假前把柱子好好冲一下,就用甲醇和异丙醇冲了柱子,年后用的时候就发现色谱峰开始前沿的厉害,刚开始把柱子反冲2h会好一些,但是用完用甲醇一冲第二天就又前沿的厉害了,现在反冲也没有用了。样品用的流动相溶解的,流动相是甲醇:pH7.0 PBS(20mM)=56:44,柱温35度,色谱柱是迪科马的钻石二代。图片是年前正常的图和现在前沿的图,不知道是哪里有问题?有没有什么好的建议或者解决办法?年前正常时

现在峰前沿
推荐答案:myoldid回复于2021/03/31
峰前伸的可能性有
1. 样品过载:被保留的样品在正常出峰时间前陆续出来,形成前沿峰。降低样品含量。

2. 样品溶剂选择不恰当:当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰,例如,在反相色谱中用乙腈做样品溶剂,而流动相的洗脱力较弱时会出现前沿峰。选择流动相或者接近流动相的比例作为样品溶剂。

3. 色谱柱损坏:色谱柱柱效损失,不能对物质形成保留。更换色谱柱。


你的这个很可能是柱子不行了。先看看你柱子的说明书上的耐受pH,最好别超过了柱子的pH耐受范围。
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Insm_44969230
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王小波的猪
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应该是柱子问题,我今天做样品也是,峰处成这个样子,换个柱子就好了,但是具体是柱子哪里有问题,还请大侠们指导一下。
myoldid
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峰前伸的可能性有
1. 样品过载:被保留的样品在正常出峰时间前陆续出来,形成前沿峰。降低样品含量。

2. 样品溶剂选择不恰当:当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰,例如,在反相色谱中用乙腈做样品溶剂,而流动相的洗脱力较弱时会出现前沿峰。选择流动相或者接近流动相的比例作为样品溶剂。

3. 色谱柱损坏:色谱柱柱效损失,不能对物质形成保留。更换色谱柱。


你的这个很可能是柱子不行了。先看看你柱子的说明书上的耐受pH,最好别超过了柱子的pH耐受范围。
lijing320323
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安平
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更换色谱柱试试为好。


既然清洗后有变化,那么基本可以确认色谱柱问题。

应该是柱子内存在污染物
歪果仁zZ
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m3321714
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这个好像不太严重,可以修补的,拆开柱子,看柱头有没污染、塌陷,有点话找根废的柱子把填料弄点过来把柱头填好,拧紧就好!注意不好操作太多,我们不具备填充柱子的条件,只能略微的修补!
lumanman
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今天把柱子拆开看了一下,比柱管低了差不多一毫米,这应该就是所谓的塌陷了吧???

柱头
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2021/4/3 22:00:27 Last edit by lumanman
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