主题：【分享】一次能力验证遇到的问题

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avih1981

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发表于：2021/09/21 16:47:52 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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一次能力验证遇到的问题

在一次能力验证中发现所给样品破碎程度与我们平时工作中样品破碎程度有一定差别，且发现有机氯农药在同一种蔬菜样品、不同破碎程度响应值有很大差别，为验证这一问题，做了如下实验。

一、材料与方法

1、试验仪器及试剂

gc 450气相色谱仪配有ECD检测器、自动进样器、分流/不分流进样口；高速分散均质机(上海标本模型厂)、氮吹仪、快速混匀器、电子天平；均浆机；氮吹仪。乙腈（色谱纯）、丙酮（色谱纯）、氯化钠（分析纯）。

2、实验方法

根据《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留检测方法》（NY/T 761-2008）进行检测。

3、试验材料

选择冬瓜、黄瓜、西红柿、茄子、西葫芦、梨六种蔬菜水果分别破碎至两种程度。

4、标准溶液的配置

标准溶液由农业部环境保护科研监测所提供，质量浓度均为100μg/mL。有机磷标液用丙酮稀释10.0μg/mL；有机氯标液用正已烷稀释至10.0μg/mL。

图1：试验仪器与材料

二、试验条件和过程

（一）实验条件

色谱柱：VF-1ms（30m×0.32mm×0.25um）；温度：80℃保持1min，以15℃速度上升到280℃,保持10.00min。进样体积：1μL；进样品：250℃，不分流进样；检测器300℃；进样口温度：250℃，氮气流速：30mL/min；柱流速：2mL/min。

（二）净化提取过程

将选择的样品破碎混匀后装入塑料盒内。准确称取25.0g试样, 加入50mL乙腈,在匀浆机中高速匀浆2min后用滤纸过滤。过滤前用纯水湿润滤纸，过滤结束时用玻璃棒压滤纸挤净滤液。滤液收集到装有5-7g氯化钠的100mL具塞量筒中，盖上盖子，剧烈震荡1min，在室温下静置30min,使乙腈相和水相分层。用大肚管从100mL具塞量筒中分别吸取10.00mL乙腈溶液于两个小烧杯中,将烧杯放在80℃水浴锅上加热,杯内缓缓通入氮气,蒸发近干。将弗罗里夕柱预淋洗（依次用5.0mL丙酮+正已烷(10+90)、5.0mL正已烷预淋洗）。预淋洗结束后将样品液倒入小柱内，用刻度离心管承接，用5mL丙酮+正已烷(10+90)冲洗烧杯后淋洗小柱，并重复一次。50℃氮吹至2ml左右，正己烷定容至5mL，在混匀器上混匀，用一次性吸管移入2mL进样瓶内，上机测定。

图2：净化提取过程

（三）加标过程

根据计算公式：标液浓度×吸出量=所配标液浓度×容量瓶容量

样品加标：三唑酮、三氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、联苯菊酯标液质量浓度均为10μg/mL。按公式计算得出，吸250μl到25g样品中，加标浓度为0.1μg/g，样品处理完成后上机测试峰面积和保留时间。

基质加标：三唑酮、三氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、联苯菊酯标液质量浓度均为10μg/mL。将空白样品前处理后定容的5.0mL，2mL作空白，其余3mL配制混标。按公式计算需吸20μL到2mL基质溶液中，配制浓度为0.1μg/mL，配制完成后上机测试峰面积和保留时间。

三、结果分析

(一)用溶剂标液计算时，回收率在60%-145%之间。(见表1)

表1：用溶剂标液计算有机氯农药加标准确度和精密度结果

名称		添加含量 (mg/kg)	检测结果（ mg/kg）		均值（mg/kg）	回收率（%）	准确度标准要求	变异系数RSD（%）	精确度标准求%
名称		添加含量 (mg/kg)	样品1	样品2	均值（mg/kg）	回收率（%）	准确度标准要求	变异系数RSD（%）	精确度标准求%
冬瓜	三唑酮	0.1	0.0586	0.0622	0.0604	60	80～120	4.2	-20～+10
	三氟氯氰菊酯	0.1	0.0886	0.0920	0.0903	90	80～120	2.7	-20～+10
	氯氰菊酯	0.1	0.1293	0.1411	0.1352	135	80～120	6.2	-20～+10
	联苯菊酯	0.1	0.1265	0.1311	0.1288	129	80～120	2.5	-20～+10
黄瓜	三唑酮	0.1	0.0713	0.0683	0.0698	70	80～120	3.0	-20～+10
	三氟氯氰菊酯	0.1	0.1153	0.1051	0.1102	110	80～120	6.5	-20～+10
	氯氰菊酯	0.1	0.1343	0.1401	0.1372	138	80～120	3.0	-20～+10
	联苯菊酯	0.1	0.1201	0.1295	0.1248	125	80～120	5.3	-20～+10
西红柿	三唑酮	0.1	0.0716	0.0684	0.0700	70	80～120	3.2	-20～+10
	三氟氯氰菊酯	0.1	0.1132	0.1068	0.1100	110	80～120	4.1	-20～+10
	氯氰菊酯	0.1	0.1352	0.1284	0.1318	132	80～120	3.6	-20～+10
	联苯菊酯	0.1	0.1261	0.1253	0.1257	126	80～120	0.45	-20～+10
茄子	三唑酮	0.1	0.0643	0.0661	0.0652	65	80～120	2.0	-20～+10
	三氟氯氰菊酯	0.1	0.1015	0.1033	0.1024	102	80～120	1.2	-20～+10
	氯氰菊酯	0.1	0.1353	0.1291	0.1322	132	80～120	3.3	-20～+10
	联苯菊酯	0.1	0.1231	0.1293	0.1262	126	80～120	3.5	-20～+10
西葫芦	三唑酮	0.1	0.0713	0.0779	0.0746	75	80～120	6.3	-20～+10
	三氟氯氰菊酯	0.1	0.1114	0.1094	0.1104	110	80～120	1.3	-20～+10
	氯氰菊酯	0.1	0.1365	0.1411	0.1388	139	80～120	2.3	-20～+10
	联苯菊酯	0.1	0.1384	0.1292	0.1338	134	80～120	4.9	-20～+10
梨	三唑酮	0.1	0.0835	0.0765	0.0800	80	80～120	6.2	-20～+10
	三氟氯氰菊酯	0.1	0.0921	0.1005	0.0963	96	80～120	6.2	-20～+10
	氯氰菊酯	0.1	0.1426	0.1478	0.1452	145	80～120	2.5	-20～+10
	联苯菊酯	0.1	0.1272	0.1314	0.1293	129	80～120	2.3	-20～+10

(二)用基质标液计算时，回收率在90%-110%之间，回收率比用溶剂标液计时好。(见表2)

表2: 用基质标液计算有机氯农药基质加标准确度和精密度结果

名称		添加含量 (mg/kg)	检测结果（ mg/kg）		均值（mg/kg）	回收率（%）	准确度标准要求	变异系数RSD（%）	精确度标准求%
名称		添加含量 (mg/kg)	样品1	样品2	均值（mg/kg）	回收率（%）	准确度标准要求	变异系数RSD（%）	精确度标准求%
冬瓜	三唑酮	0.1	0.1036	0.1032	0.1034	103	80～120	0.48	-20～+10
	三氟氯氰菊酯	0.1	0.1057	0.1039	0.1048	105	80～120	1.2	-20～+10
	氯氰菊酯	0.1	0.1101	0.1003	0.1052	105	80～120	6.6	-20～+10
	联苯菊酯	0.1	0.1016	0.0952	0.0984	98	80～120	4.6	-20～+10
黄瓜	三唑酮	0.1	0.1085	0.0999	0.1042	104	80～120	5.8	-20～+10
	三氟氯氰菊酯	0.1	0.0944	0.0864	0.0904	90	80～120	6.2	-20～+10
	氯氰菊酯	0.1	0.1151	0.1055	0.1103	110	80～120	6.2	-20～+10
	联苯菊酯	0.1	0.1093	0.1025	0.1059	106	80～120	4.5	-20～+10
西红柿	三唑酮	0.1	0.1105	0.1063	0.1084	108	80～120	2.7	-20～+10
	三氟氯氰菊酯	0.1	0.1101	0.1057	0.1079	108	80～120	2.9	-20～+10
	氯氰菊酯	0.1	0.1033	0.0983	0.1008	101	80～120	3.5	-20～+10
	联苯菊酯	0.1	0.1033	0.1061	0.1047	105	80～120	1.9	-20～+10
茄子	三唑酮	0.1	0.1101	0.1077	0.1089	109	80～120	1.6	-20～+10
	三氟氯氰菊酯	0.1	0.1026	0.0976	0.1001	100	80～120	3.5	-20～+10
	氯氰菊酯	0.1	0.0956	0.0902	0.0929	93	80～120	4.1	-20～+10
	联苯菊酯	0.1	0.0972	0.0852	0.0912	91	80～120	9.2	-20～+10
西葫芦	三唑酮	0.1	0.1060	0.1026	0.1043	104	80～120	2.3	-20～+10
	三氟氯氰菊酯	0.1	0.0953	0.0971	0.0962	96	80～120	1.3	-20～+10
	氯氰菊酯	0.1	0.1115	0.1037	0.1076	108	80～120	5.1	-20～+10
	联苯菊酯	0.1	0.1013	0.1093	0.1053	105	80～120	5.4	-20～+10
梨	三唑酮	0.1	0.0886	0.0922	0.0904	90	80～120	2.8	-20～+10
	三氟氯氰菊酯	0.1	0.0952	0.1052	0.1002	100	80～120	7.1	-20～+10
	氯氰菊酯	0.1	0.0994	0.0974	0.0984	98	80～120	1.4	-20～+10
	联苯菊酯	0.1	0.1103	0.1047	0.1075	108	80～100	3.7	-20～+10

(三)观察标液图谱和样品图谱出现平头峰。两种不同样品的峰面积相差一半以上，差别比较大。

图3：平头峰峰面积比较

怀疑原因有二：

1.样品破碎程度不同造成响应值有很大差别。

2.因出现平头峰，峰面积计算不准确造成。

逐一进行排查，先将仪器灵敏度由10调整为1后重新进样。标液图谱和样品图谱出峰正常，两种不同样品的峰面积差别不大。

图4：调整灵敏度后峰面积比较

四、结论

（一）农残检测过程中普遍存在基质效应，影响检测结果的准确度和精密度。去除基质效应的方法有多种，用不含待测物的基质配制标准溶液是检测过程中常用且方便成本低的一种方法。此次实验中用用基质标液计算回收率明显高于用溶剂标液计时。

（二）衬管与色谱柱污染是造成回收率过高或过低的主要原因。应经常更换进样垫与衬管，并定期对色谱柱进行老化处理，确保色谱柱干净。特别在进行能力验证时，要用新的进样垫与干净的色谱柱。

（三）正常的色谱图是计算准确的前提，平头峰的出现会造成对组分无法准确地定性定量分析。能力验证中出现的问题，应当是平头峰引起的计算不准确。出现平头峰，应该从以下几方面来解决：

1.减少进样量。此次进样量为1μL，再减小进样量会引起误差增大,故未减少进样量。

2.对样品进行稀释。稀释样品，需要准确计算稀释倍数、合理稀释，稀释过程中也可能引入误差。

3.进样时加大分流比。

4.调节色谱仪衰减倍数，从而调节灵敏度。色谱仪的衰减倍数因仪器不同而有差别，有的有三档，有的有两档，gc450有1和10两个档。出现平头峰后由10档调到1档，解决平头峰问题；响应值小时也可由1档调到10，增大响应值。

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