16年开始参加工作,一致在药企做QC,HPLC
GC AAS UV IR能用到的都挺熟悉
去年被裁,碰巧安捷伦仪器工程师介绍了一个初创公司
遂入职,入行工艺分析研究,主要工作内容是医药中间体的分析方法开发和样品检测
如何快速的进行HPLC方法开发
HPLC标准梯度A0.1%磷酸B乙腈 5%B-95%B标准梯度,结合色谱柱规格,确定梯度变化速率和流速
如100*2.1mm的色谱柱,梯度变化为10分钟,流速为0.5ml/min
时间 | B% |
0 | 5 |
0.5 | 5 |
10.5 | 95 |
11.5 | 95 |
12 | 5 |
13.5 | 5 |
这样就得到一个通用方法,然后根据峰的分离情况,目标化合物的结构,优化梯度,筛选色谱柱,选择流动相等
这时,峰在保留时间越小极性越大,保留时间0.5-1min,出峰靠前,说明化合物极性极大,需要增加流动相极性(增加水相比例,但常规C18水相比例最高为95%),增加色谱柱极性(换极性键合c18柱,如AQ-C18,T3等)
保留时间12-13.5说明化合物极性极小,出峰靠后,说明化合物极性极大,需要降低流动相极性,(增加有机相比例或者95%B的时间或者增加有机相洗脱强度,如将95%B的保持时间增加到3min),降低色谱柱非极性(换保留更弱的C18或C8 C4等)
两个或者多个峰都出在中间,分离不佳,可以降低有机相变化速率和初始有机相比例来优化,都无效果就需要换柱子和流动相了