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主题：【已应助】雌二醇丹磺酰氯衍生化无信号

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渣渣刀
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发表于：2024/04/26 09:38:27 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
0.1mol/L碳酸氢钠溶液复溶，加入等体积1g/L的丹磺酰氯丙酮溶液，60℃孵育5min，上机测试，无信号，有大佬做过这个衍生化么
推荐答案：通标小菜鸟回复于2024/04/26
楼主参考一下这篇文献，有可能是你的衍生化过程出了问题，也有可能是LCMS仪器参数设置不合适。
《超快速液相色谱-串联质谱法检测人血清中雌酮、雌二醇及雌三醇的方法学研究 》
建立灵敏、可靠、稳定的柱前衍生化超快速液相色谱－串联质谱（ultra‐fast liquid chromatography‐mass spectrometry ， U FLC‐M S／M S ）方法检测人血清中超微量雌酮、雌二醇和雌三醇。方法：取200μL血清样品，采用两步液萃取法，通过丹磺酰氯衍生化后进行样品分析，以雌二醇‐d3作为内标。采用Welch Ultimate UHPLC XB‐C18色谱柱（2．1 mm ?50 mm ，1．8μm），乙腈－水（含0．1％甲酸）为流动相，梯度洗脱，流速0．20 mL／min ，柱温40℃，进样量10μL。在电喷雾离子（electrospray ioniza‐tion ，ESI）源正离子模式下，选择多反应监测（multiple reaction monitoring ，MRM ）模式。经检测，雌酮、雌二醇、雌三醇及内标的检测离子对分别为：m／z为504．0→171．0、m／z为506．0→171．0、m／z为522．0→171．0和 m／z为509．0→171．0。结果：丹磺酰氯衍生法可大幅度提高雌酮、雌二醇、雌三醇在ES I源下的离子化效率，血清中3种成分的线性范围均为0．01～5．00μg／L ，定量下限均达到10 ng／L ，样品回收率50％以上，批内、批间准确度与精密度均小于15％，满足生物样品的分析要求。结论：该方法灵敏度高、重现性好，可以用于临床血清样品中雌激素水平的定量分析。
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通标小菜鸟
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2024/4/26 10:26:55 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主参考一下这篇文献，有可能是你的衍生化过程出了问题，也有可能是LCMS仪器参数设置不合适。
《超快速液相色谱-串联质谱法检测人血清中雌酮、雌二醇及雌三醇的方法学研究 》
建立灵敏、可靠、稳定的柱前衍生化超快速液相色谱－串联质谱（ultra‐fast liquid chromatography‐mass spectrometry ， U FLC‐M S／M S ）方法检测人血清中超微量雌酮、雌二醇和雌三醇。方法：取200μL血清样品，采用两步液萃取法，通过丹磺酰氯衍生化后进行样品分析，以雌二醇‐d3作为内标。采用Welch Ultimate UHPLC XB‐C18色谱柱（2．1 mm ?50 mm ，1．8μm），乙腈－水（含0．1％甲酸）为流动相，梯度洗脱，流速0．20 mL／min ，柱温40℃，进样量10μL。在电喷雾离子（electrospray ioniza‐tion ，ESI）源正离子模式下，选择多反应监测（multiple reaction monitoring ，MRM ）模式。经检测，雌酮、雌二醇、雌三醇及内标的检测离子对分别为：m／z为504．0→171．0、m／z为506．0→171．0、m／z为522．0→171．0和 m／z为509．0→171．0。结果：丹磺酰氯衍生法可大幅度提高雌酮、雌二醇、雌三醇在ES I源下的离子化效率，血清中3种成分的线性范围均为0．01～5．00μg／L ，定量下限均达到10 ng／L ，样品回收率50％以上，批内、批间准确度与精密度均小于15％，满足生物样品的分析要求。结论：该方法灵敏度高、重现性好，可以用于临床血清样品中雌激素水平的定量分析。
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hujiangtao
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2024/4/26 12:11:33 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
雌二醇液质负离子模式可以直接检测啊，没必要衍生
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渣渣刀
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2024/4/26 13:42:43 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 通标小菜鸟(v3141805) 发表:
楼主参考一下这篇文献，有可能是你的衍生化过程出了问题，也有可能是LCMS仪器参数设置不合适。
《超快速液相色谱-串联质谱法检测人血清中雌酮、雌二醇及雌三醇的方法学研究 》
建立灵敏、可靠、稳定的柱前衍生化超快速液相色谱－串联质谱（ultra‐fast liquid chromatography‐mass spectrometry ， U FLC‐M S／M S ）方法检测人血清中超微量雌酮、雌二醇和雌三醇。方法：取200μL血清样品，采用两步液萃取法，通过丹磺酰氯衍生化后进行样品分析，以雌二醇‐d3作为内标。采用Welch Ultimate UHPLC XB‐C18色谱柱（2．1 mm ?50 mm ，1．8μm），乙腈－水（含0．1％甲酸）为流动相，梯度洗脱，流速0．20 mL／min ，柱温40℃，进样量10μL。在电喷雾离子（electrospray ioniza‐tion ，ESI）源正离子模式下，选择多反应监测（multiple reaction monitoring ，MRM ）模式。经检测，雌酮、雌二醇、雌三醇及内标的检测离子对分别为：m／z为504．0→171．0、m／z为506．0→171．0、m／z为522．0→171．0和 m／z为509．0→171．0。结果：丹磺酰氯衍生法可大幅度提高雌酮、雌二醇、雌三醇在ES I源下的离子化效率，血清中3种成分的线性范围均为0．01～5．00μg／L ，定量下限均达到10 ng／L ，样品回收率50％以上，批内、批间准确度与精密度均小于15％，满足生物样品的分析要求。结论：该方法灵敏度高、重现性好，可以用于临床血清样品中雌激素水平的定量分析。
看了，文章上除了衍生后萃取的步骤，都是一样的，有的文献是衍生化后直接上样，下午试试衍生后萃取
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渣渣刀
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2024/4/26 13:43:40 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:
雌二醇液质负离子模式可以直接检测啊，没必要衍生
仪器灵敏度不够啊，参考范围是20pg
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渣渣刀
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2024/4/26 18:02:39 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 渣渣刀(Insm_056cc07c) 发表:
看了，文章上除了衍生后萃取的步骤，都是一样的，有的文献是衍生化后直接上样，下午试试衍生后萃取
衍生后萃取，信号有所提高，但是远达不到文献描述的灵敏度，下次用不同色谱柱进样看看
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