水产品中孔雀石绿、结晶紫残留量的 快速测定方法 1 范围 本标准规定了水产品及其制品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿、结晶紫及其代谢物隐色结晶紫残留量的高效
液相色谱-串联质谱和高效
液相色谱的快速测定方法。本标准适用于水产品及其制品中孔雀石绿及其代谢物隐色孔雀石绿、结晶紫及其代谢物隐色结晶紫残留量的测定。 2 原理 试样中的残留物经孔雀石绿、结晶紫快速检测前处理试剂盒处理,离心,取上清液旋转蒸干,流动相溶解残渣,高速离心后,微孔滤膜过滤,用高效
液相色谱-串联质谱法或高效
液相色谱检测。 3试剂和材料 除另有规定外,所有试剂均为分析纯,水为重蒸馏水。 3.1 乙腈:
液相色谱纯。 3.2 甲醇:
液相色谱纯。 3.2 无水乙酸铵。 3.3 冰乙酸:
液相色谱纯。 3.4 5mol/l乙酸铵缓冲溶液:溶解38.5g无水乙酸铵于90ml水中,用冰乙酸调节pH到7.0,最后用水稀释到100ml。 3.5 0.1mol/l乙酸铵缓冲溶液:溶解7.71g无水乙酸铵于1000ml水中,用冰乙酸调节pH到4.5。 3.7 5mmol/l乙酸铵缓冲溶液:溶解0.385g无水乙酸铵于1000ml水中,用冰乙酸调节pH到4.5,过0.2um滤膜。 3.8 乙酸盐缓冲液:溶解4.95g无水乙酸钠及0.95g对-甲苯磺酸于950ml水中,用冰乙酸调节溶液pH到4.5,最后用水稀释到1L。 3.9 标准品: 孔雀石绿(MG)、隐色孔雀石绿(LMG)、结晶紫(CV)、隐色结晶紫(LCV)纯度大于98%。 3.10 标准溶液:准确称量的孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫,用乙腈分别配制成100ug/mL的标准贮备液,再用乙腈稀释配制成1ug/mL的标准溶液。-18℃避光保存。 3.11 混合标准工作溶液:用流动相稀释标准溶液(3.2.5),配制成孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫均为20ng/ml的混合标准溶液。0~4℃避光保存。 3.12 孔雀石绿、结晶紫快速检测前处理试剂盒 (中国检验检疫科学研究院研发北京陆桥商检新技术公司生产)。 4 仪器和设备 4.1 高效
液相色谱-串联质谱联用仪:配有电喷雾(ESI)离子源。 4.2 高效
液相色谱仪:配有紫外-可见光检测器。 4.3 匀浆机。 4.4 旋转蒸发仪。 4.5 离心机:4000r/min、8000r/min 4.6 振荡器。 4.7 聚四氟乙烯离心管:2.5 ml ,50ml,100ml,具塞。 4.8 微孔滤膜:0.45um。 4.9 超声波水浴。 5 样品制备 称样品约5.0g于50ml离心管,先加入孔雀石绿、结晶紫快速检测前处理试剂盒中的提取剂1、用均质机以8000r/min的速度均质30s,再加入提取剂2振荡1min,4000r/min离心5min,取上清液10ml于鸡心瓶中再加入异丙醇10ml50~55℃水浴旋转蒸干。残留物用(HPLC法1ml,质谱法2.5ml)流动相溶解,溶解液放入2.5ml离心管中,8000r/min离心5min后,用微孔滤膜过滤,滤液供仪器测定。 6 测定 6.1高效
液相色谱-串联质谱条件 参照国标GB/T19857-2005 6.2
液相色谱测定 6.2.1
液相色谱条件 a)色谱柱:C18柱,250mm×4.6mm(i.d.),粒度5um; b)流动相:乙腈+乙酸盐缓冲液(80+20,V/V); c)流速:1.0mL/min; d)柱温:室温; e)检测波长: 0~5.0min,618 nm; 5.0~12min,588nm;12~18min,267nm; 注:孔雀石绿618nm,结晶紫588 nm,隐色孔雀石绿、隐色结晶紫267 nm。 f)进样量:50uL 根据样液中被测孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫含量情况,选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下,孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的保留时间约为3.9min、5.8min、13.5 min、14.7 min。 7 空白试验 除不加试样外,均按上述测定步骤进行。 8 结果计算与表述 按下式计算供试样品中的孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫和隐色结晶紫残留量。计算结果需扣除空白值。
20VACS X= NMAS
X-供试组织中待测组分的残留量,ug/kg; V-最终定容体积数,mL, A-样液中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫或隐色结晶紫色谱峰的峰面积。 M-供试试料样品重量,g AS-孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫或隐色结晶紫标准工作溶液的峰面积。 20-孔雀石绿、结晶紫快速检测前处理试剂盒中提取剂1体积。 N-取上清液体积数,mL。 CS -孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫或隐色结晶紫标准工作溶液的浓度,ug/L。 9 方法检测限 本方法孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫检测限: 高效
液相色谱-质谱法均为0.5ug/kg;高效
液相色谱法为2ug/kg。 10 回收率 本方法孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫回收率: 高效
液相色谱-质谱法均为均为85%~105%;高效
液相色谱法均为85%~105%。 11 精密度 本方法孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的RSD为:高效
液相色谱-质谱法均小于10%;高效
液相色谱法均均小于10%。 附 录 A (资料性附录) 图1、高效
液相色谱法孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫色谱图 注:保留时间孔雀石绿4.0min、隐色孔雀石绿13.6min、结晶紫5.4min、隐色结晶紫14.7min。