主题：【活动】玩游戏，学液质

你认为影响质谱灵敏度的最主要因素有哪些？

如果仪器本身没有问题--没有污染，各部件都处于良好状态，我认为离子化效率是影响灵敏度的最直接因素。
具体有三个方面：样品（本身性质）及前处理（基质效应），液相条件（流动相比例、缓冲盐、PH……）和质谱条件（离子化模式，雾化气、干燥气温度和流量，毛细管电压，shield电压等）。
优化的目的就是使样品在保证分离的情况下尽好的离子化，当然质谱条件中一些参数是为了在尽量减小噪音的情况下把样品离子引入质量分析器，但是总体来讲，我认为离子化效率是影响灵敏度的主要因素。

问题：能否举个lc-ms样品前处理的实例——最好是食品、血液等比较复杂样品的——在这些样品中，基质效应很明显，前处理方法直接影响试验结果、甚至成败，所以比较感兴趣。

楼层已选

Determination of chloramphenicol residues in shrimps by liquid
chromatography–mass spectrometry
M. Ramos, P. Mun˜oz*, A. Aranda, I. Rodriguez, R. Diaz, J. Blanca


Sample extraction and clean-up
Ten grams of blended shrimps were weighed into a centrifuge tube of 100 ml, and 150 ml of the internal standard working solution of 5D-chloramphenicol and 40 ml of phosphate buffer were added.The tubes were introduced in an ultrasonic bath for about 15 min, centrifuged till separation of the sediment and the supernatant was filtered through a Millex filter. After conditioning a C cartridge with 5 ml of  methanol and 5 ml of water, an aliquot of 30 ml ofthe filtered supernatant was gently pressed through  the cartridge by means of a disposable syringe. The cartridge was then washed with 5 ml of water and 5 ml of a mixture of 5% acetonitrile in water. Chloramphenicol was eluted from the cartridge with 10 ml of 30% of acetonitrile in water in a 20-ml reagent tube, to which 2 ml of ethylacetate were added. The mixture was shaken and after separation the upper layer was transferred to a 10-ml tube and the extraction with ethylacetate was repeated twice. The combined organic phases were evaporated till dryness in a water bath at 50 8C under a gentle stream of nitrogen. The dry residue was dissolved in 300 ml of the HPLC mobile phase and 25 ml of this final extract were injected in the chromatographic system。

    基质效应是不是很大我倒没有一个很深刻的概念，我是做兽药残留分析的，一般通过有机试剂提取，脱脂，净化过柱就差不多了。当然前处理做的越好方法就越好，前处理做的不好，不管是不是液质的方法，对什么仪器方法都会有影响。不知道说的对不对哈，敬请指点。

  我的问题是你在使用液相质谱做检测方法的时候遇到过“残存效应”（比如进空白溶剂也会有峰，空白样也有峰等等诸如此类的现象），如果遇到了你是怎么解决的？？
 
  我选100楼吧，希望做人能够做成百分之一百成功，当然这只是一个愿望了

原文由 zhufangwei 发表:
Determination of chloramphenicol residues in shrimps by liquid
chromatography–mass spectrometry
M. Ramos, P. Mun˜oz*, A. Aranda, I. Rodriguez, R. Diaz, J. Blanca


Sample extraction and clean-up
Ten grams of blended shrimps were weighed into a centrifuge tube of 100 ml, and 150 ml of the internal standard working solution of 5D-chloramphenicol and 40 ml of phosphate buffer were added.The tubes were introduced in an ultrasonic bath for about 15 min, centrifuged till separation of the sediment and the supernatant was filtered through a Millex filter. After conditioning a C cartridge with 5 ml of  methanol and 5 ml of water, an aliquot of 30 ml ofthe filtered supernatant was gently pressed through  the cartridge by means of a disposable syringe. The cartridge was then washed with 5 ml of water and 5 ml of a mixture of 5% acetonitrile in water. Chloramphenicol was eluted from the cartridge with 10 ml of 30% of acetonitrile in water in a 20-ml reagent tube, to which 2 ml of ethylacetate were added. The mixture was shaken and after separation the upper layer was transferred to a 10-ml tube and the extraction with ethylacetate was repeated twice. The combined organic phases were evaporated till dryness in a water bath at 50 8C under a gentle stream of nitrogen. The dry residue was dissolved in 300 ml of the HPLC mobile phase and 25 ml of this final extract were injected in the chromatographic system。

    基质效应是不是很大我倒没有一个很深刻的概念，我是做兽药残留分析的，一般通过有机试剂提取，脱脂，净化过柱就差不多了。当然前处理做的越好方法就越好，前处理做的不好，不管是不是液质的方法，对什么仪器方法都会有影响。不知道说的对不对哈，敬请指点。

  我的问题是你在使用液相质谱做检测方法的时候遇到过“残存效应”（比如进空白溶剂也会有峰，空白样也有峰等等诸如此类的现象），如果遇到了你是怎么解决的？？
 
  我选100楼吧，希望做人能够做成百分之一百成功，当然这只是一个愿望了

回复12楼：
我曾经遇到空白残留的问题，困扰了我很久。感触有以下几条：
1.洗针水的影响。要经常注意洗针水是否充足。我的经历就是：在洗针水快完时没发现，结果进了几个高浓度的样品后，以下进的低浓度样品就出现了难以置信的很大的峰面积。洗针水对液质的影响比对一般液相的影响大很多很多。
2.进样体积的影响。这主要是对于高浓度样品来说。在连续进高浓度样品几针后，都要接着进一针甲醇，或甲醇水。因为高浓度样品容易残留。所谓高浓度样品对不同样品不同质谱有不同的规定，一般的1ug/ml的样品对质谱来说算是很高的了。
3.不同代测物的影响。有些物质容易残留在进样针或质谱里。我没作过多少样品。现在作的甲氨蝶呤就相对容易残留在进样针里头。一般很少残留在质谱里的。
........
所以在遇到空白有残留的时候，我一般是这么处理的：
1.排除这个空白在前处理过程中是否被污染。如进样枪污染，装样瓶未洗净等。
2.发现空白残留后，按代测物的性质加新的洗针水，如样品水溶性较大，则用甲醇水为洗针水，若脂溶性很大，则直接用甲醇。
3.或者在发现残留后，连续进甲醇或甲醇水，直到残留几乎没有，并在液相端进行洗针。
4.如果还不行，则将质谱和液相断开，用异丙醇为流动相，且用异丙醇装样，不断的进异丙醇洗针。记住，一定要断开质谱。
5.如果还不行，那么要么把进样针拆下来超声清洗要么检查是否坏了，这个基本本人不会。要请工程师出马。
6.还有就是停下手上的工作。让别人来用这个液质。只要你的残留对别人的检测没有影响。通过别人不断 的进样，就可以把残留冲洗干净。既可以节省时间也可以节省试剂，心情也好。我的残留就是在用异丙醇仍然不能解决之下给别人进了几百个样后冲干净了的。这招很灵。

我提的问题主要是我最近要解决的问题：
1.两性代测物，但水溶性更大一些，要用液质来测，大家怎样前处理这个血样，使得所进样品既干净又能有比较高的回收率？
2.对于测红细胞中药物的浓度，红细胞的介质效应非常大，使得回收率很低，大家怎样处理介质效应？
3.哪些试剂（包括流动相、前处理所用试剂）可以进液质？如甲醇、乙腈这些大家都知道了，可否作个总结？

这上面3个问题，挑感兴趣的答就行了。我选78楼。

不好意思你的问题我回答不了
我公司现在正准备买一台液质联用仪
主要用于助焊剂、焊锡膏成分分析不知道道如何进行样品前处理
我选择240楼

3.哪些试剂（包括流动相、前处理所用试剂）可以进液质？

常用流动相为甲醇、乙腈、水和他们的不同比例的混合物；
一些易挥发的缓冲液，如甲酸铵、乙酸铵等；
还可以加入易挥发的酸碱，如甲酸、乙酸和氨水等调pH
所有流动相要用色谱纯的

液质接口避免进入不挥发的缓冲液，避免含磷和氯的缓冲液；盐分太高会抑制离子源的信号和堵塞喷雾针及污染仪器（含钠和钾的吃饭必须小于1mmol/L）

我的问题是：谁用Agilent的QQQ，是不是正模式的灵敏度较低呀？（我才用不久）

我选99楼

原文由 yangsophia 发表:
我的问题是：谁用Agilent的QQQ，是不是正模式的灵敏度较低呀？（我才用不久）

我用的就是Agilent的6410QQQ，2007年初购买的，当时因为负模式调谐没做好，所以感觉负模式灵敏度低，正模式一直很正常，灵敏度还算不错。现在负模式调谐做好了，感觉灵敏度也还可以吧。如果你感觉灵敏度偏低可检查一下原因，有没有加EMV电压的？

问题：大家继续回答13楼还留下的两个问题……

对不起，那两个问题还是答不上来。我用的是岛津LC-MS2010EV,两年三个月，主要做初级农产品中的农药残留。但一直以来都被空白样品也有峰而苦恼，已经排除空白试剂的干扰，不知是啥原因，前处理不干净？不是说质谱有选择性的，也可以起到分离的作用吗？样品本身就是阳性，可样品采集是控制的，在未施药前采的，并且有好几个农药都出现相同的问题，都巧合吗？所以现在只能想是否农药的质荷比太小，如m/z191、297，或sim模式本身容易有干扰？干扰峰一般在0.05mg/L下，盼有好的解释！
我选30楼

您好,我是刚刚接触到液质,不知道的很多,所以请您帮我解决各问题,我现在知道我的目标物分子量是在67000-80000之间,是不是也要如您上面所说的建立一个方法并在方法里设置相应的质荷比啊?
对不起,以为我对液质的了解度几乎为零,这个问题很白痴,但恳请您帮我分析下,谢谢!

我提的问题主要是我最近要解决的问题：
1.两性代测物，但水溶性更大一些，要用液质来测，大家怎样前处理这个血样，使得所进样品既干净又能有比较高的回收率？
2.对于测红细胞中药物的浓度，红细胞的介质效应非常大，使得回收率很低，大家怎样处理介质效应？
3.哪些试剂（包括流动相、前处理所用试剂）可以进液质？如甲醇、乙腈这些大家都知道了，可否作个总结？
这上面3个问题，挑感兴趣的答就行了。我选78楼。


回答13楼第一个问题：
可以先加沉淀剂沉淀蛋白，离心，上清液调节ph值过离子交换固相萃取小柱净化，洗脱、定容检测，如果要有良好的回收率，条件允许可以使用同位素内标定量。
我的问题;一次实验的时候发现前面的样品跑的很正常，但后面的样品的灵敏度只是前面样品灵敏度的五分之一，为什么到现在也没想明白，我的仪器是Agilent1200-6410？
我选60楼