主题：【资料】荧光素钠的HPLC检测，急

采用HPLC法对低分子量肝素钠(LMWH)分子量及其分布进行了测定。流动相选用2.84%的硫酸钠溶液，采用紫外检测器与示差折光检测器串联连接，紫外检测波长234 nm，色谱柱为Protein-Pak Φ8 mm×300 mm。结果表明：所测三批LMWH的重均分子量分别为3 158 D,4 387D,4 226D；其中分子量小于8 000D的量分别为86.2%，89.4%，87.8%，符合英国药典1993年增补版标准。

低分子量肝素钠是商品肝素钠经化学解聚而得的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，临床上主要用于术后深静脉血栓、不稳定性心绞痛及血液透析等。近年来，国内外对低分子量肝素的剂型及临床应用报道较多，但以HPLC法测定其分子量报道较少，现采用HPLC法对LMWH分子量及其分布进行测定。

1　实验部分
1.1　仪器、药品及试剂
高效液相色谱仪(Waters公司)。低分子量肝素标准品(HO 190 000，进口，Mna为3 700)；供试品三批(色谱自制)；所用试剂均为色谱纯。
1.2　方法［1］与结果
以Protein-Pak Φ8 mm×300 mm为色谱柱，选用2.84%(w/v)硫酸钠作流动相，柱温40℃，示差折光检测器进口与UV检测器出口相连，紫外检测波长为234 nm。
精密称取低分子量肝素标准品及供试品，按10 mg/ml的比例加流动相溶解；用流动相配制0.01 mol/L的NaN3溶液。按以上条件进样，进样量10 μl，用NaN3测得紫外检测器与示差折光检测器出峰时间有一定的间隔，其间隔时间为15 s．

根据标准品在RI曲线及UV234曲线下的面积计算r,r=ΣRI/ΣUV234［2］；图谱上任一点的分子量Mi=Mna RIi/r UV234i(Mna为低分子量肝素标准品的数均分子量3 700，RIi为此点的RI面积，UV234i为此点的UV234面积)，则供试品的重均分子量Mw＝Σ(RIi Mi)/ΣRIi。分子量分布按RI色谱图下小于8 000D的RI面积占RI总面积的百分数，结果见表1。

Table 1　The molecular weight and its distribution results of LMWH

Batch NO. mw Molecular wieght distribution 
9707 3158D 86.2% 
9702 4387D 89.4% 
9703 4226D 87.8% 

条件不用变，只改变波长就可以了。
你还可以试着讲紫外检测器和荧光检测器串联起来用，同时用紫外和荧光检测。但有一点要记住，串联时一定紫外在前，荧光在后。

一楼较详细。多谢分享了

您这个是低分子肝素钠的条件，也不是我要的荧光素钠啊？

我现在有原来的紫外条件，还有查到的另外两个荧光条件，由于仪器使用时间上的限制，不能挨个摸了，想找一种检出浓度比较高的方法，这个峰高，峰面积，主要跟什么有关呢？我把条件列在下面，大家帮忙看一下哪个会最适合呢？　
１，紫外检测器的条件：（没测出来那个）：三乙胺溶液（７．５ml溶至１０００ＭＬ水里，ＰＨ值调至３．０）：甲醇：乙腈＝５：２：３，紫外检测波长２５４nm．
２，０．０５Ｍ磷酸二氢钾（ＰＨ７．４）：甲醇＝５５：４５，流速０．８－１．０，激发波长４９０，发射波长５１５，保留时间６分钟．
３，０．１mol/L磷酸二氢钠溶液（ＰＨ４．４）：甲醇＝１：１，激发波长４７０，发射波长５１３，保留时间３分钟多一点．
是把条件一的波长改为激发波长４９０，发射波长５１５／激发波长４７０，发射波长５１３（波长哪个行呢）还是试另两个中的一个，这三个中哪个条件检出的浓度会比较高？我就试哪个．