主题：【谱图】大家图谱来找茬(第三季)－倒峰解析

出现倒峰可能原因有氘灯老化，流通管道或池不通畅，样品和流动相中含有小颗粒,气泡等，也有文献认为倒峰主要是水分引起。
甚至还有可能是溶剂峰，如果流动相有紫外吸收的杂质，使用紫外检测器时，就会产生倒峰。
用示差折光检测器时，如果组分的折光指数低于流动相的折光指数，也会出现倒峰。
此外，检测器的极性接反了，也会出现倒峰。
对于该谱图出现的情况，可以考虑使用流动相溶解稀释样品，这招效果蛮不错的；或者考虑改变检测波长。

针对峰的漂移：
在更换流动相后，要尽量冲久一点，待系统充分饱和再进样；
尽量使用柱温箱，温度对出峰时间也会影响，尤其是昼夜温差较大的时候；
还可以考虑样品和对照穿插交替进样，因为试过遇到某些比较变态（只能这样形容）的检品，无论怎么折腾都会飘，无奈，只能样品和对照穿插交替进样，在报告书中附带说明。

楼上的见解很好，受益匪浅啊！

第三个很可能是因为电压干扰导致的倒峰

原文由 03yx2 发表:
大家图谱来找茬(第三季)
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请您来分析:
1.产生倒峰的原因有哪些？

2.图谱中一个重要问题是倒峰，一个是离峰1很近的倒峰，一个是离峰1比较远，请问有什么区别？针对峰的漂移你有什么好的建议嘛?

3.如果要对图中的峰1进行含量测定,你觉得应该怎样改善条件才可以更好的进行定量分析.
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图谱如下:

1、样品峰1：

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2、该物质的对照品图谱：

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3、另一类倒峰：




【附录】凡参与活动者，必有重奖

我基本赞成1、2楼的hyban的观点，但是对于已经25min出峰后的倒峰，应该不会是溶剂峰，溶剂峰出来比较早，一般在5min前，所以用流动相来配比定容供试液不会有作用
倒峰产生的原因我认为主要有两个，就如1、2楼的hyban说的检测器问题，光源不稳定，背景噪音大，如果我没有说错的话，你用的这个检测器是Agilent的紫外或是DAD（仪器用的比较多的板油做仪器耐用性的时候就能对比出来）；另外一方面是当流动相极性比例发生大幅度改变时，泵后流动相由于死体积大或者泵来不及调整导致流动相混合不均匀，或者气泡没有完全除干净，温度未恒温等原因都会产生倒峰

1.倒峰的出现，无怪乎有一下几个原因：试样的溶剂峰；试样中的杂质峰（且含量较大）；流动相中有气泡；检测器性能不稳等。
2.第三幅图的倒峰应该不是溶剂峰。对于峰漂移的问题，对照品浓度和样品浓度应尽可能的接近，另外两者稀释的溶剂也应一致。
3.对于第三幅图，应该对峰1的定量不会带来多大影响的。
对于第一幅图，应该在流动相、检测器方面着手改进或完善：若是气泡问题，就对流动相彻底脱气；若是杂质问题，就改变流动相组成或配比，或者由恒流变梯度，或变换检测器波长等；若是溶剂的问题，就更换溶剂或用流动相稀释；若是检测器的性能问题，就降低检测器的灵敏度或更换光源等。

来好好学习的...

这些问题经常遇到,最怕的就是被问为什么会有倒峰.


对于第二个倒峰我估计是因为梯度的剧烈变化导致的.

首先对你的标样和样品进行全波长扫描,在3D谱图里观察最大吸收波长
出现倒峰是因为你选的波长不合适,其物质吸收在流动相吸收之前造成的

可能原因有氘灯老化，流通管道或池不通畅，样品和流动相中含有小颗粒,气泡等。也有文献认为倒峰主要是水分引起。需要针对原因解决。

可以参考：http://www.sqyjs.com/Get/wenhua/0641117461583434.htm




一、泵的使用和维护

1、防止固体微粒进入泵内。因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞杆、密封环、缸体和单向阀。泵的入口都应连接砂滤棒，输液棒的滤器经常清洗或更换。

2、流动相不应含有任何腐蚀性物质。例如氯仿、丙酮、二氯甲烷等，这些溶剂将会Peek树脂部件变脆；还有含有卤离子的流动相或能产生卤离子的流动相，如果使用了，分析结束后，应立即用去离子水清洗整个管路，因卤离子会腐蚀不锈钢部件或管路。流动相含有缓冲盐不应停泵保留在泵内时间过长，由于蒸发甚至由于溶液的净置就可能析出晶体。

3、泵工作时要注意流动相不要被用完，否则空泵运转会加快磨损柱塞杆和密封圈。输液泵的压力不要太高，否则会使密封圈变形，降低密封圈使用寿命。

4、在使用双泵过程中，如果不是梯度洗脱，尽量先混合。如果一个是有机溶剂，一个是含盐溶液，在用双泵的时候，有可能会析出晶体。

5、在使用缓冲盐作流动相实验结束之前和结束后，都要用含10％甲醇水溶液冲洗管路，不能用纯水冲洗，因纯水会对柱子造成损坏。进样阀要用适宜的溶剂进行清洗。

二、色谱柱的使用和维护

1、避免压力和温度的急剧变化以及机械震动。在进样的时候，进样阀扳手不能转动太慢，更不能停留在中间，如停留在中间，泵内压力剧增，这时再转动到进样位置时，过高的压力会损坏色谱柱。如出现机械震动（掉在地上）则会改变填料的充填状态。

2、在使用色谱柱过程中，不应直接从有机溶剂到水，反之，也不要从水直接改变到有机溶剂。

3、色谱柱一般不能反冲，除非生产者指明。

4、冲洗色谱柱时，每种溶剂至少冲洗50ml。

5、装在机子上的色谱柱，应每隔4～5天冲洗15分钟，可以避免长菌，保护色谱柱。

6、PH的调节尽量在2～9之间

7、保存色谱柱时，柱接头要拧紧。

三、输液泵产生 故障及排除方法

1、没有流动相流出，又无压力显示。原因可能是泵内有大量气体，这时打开排液阀，使泵在较大流量下运转，将气体排出，也可用一个针筒在泵出口处帮助抽出气体。另一个原因使密封圈损坏。

2、压力和流量不稳。原因①可能有气泡；②单向阀污染，可卸下单向阀，浸入异丙醇内超声清洗；③沙滤棒内有杂质或微生物堵塞，可将沙滤棒浸入流动相中超声清洗，也可将滤头放入4mol/l硝酸溶液中，迅速除去微生物。也可能是盐堵塞，可放入水中清洗；④在线过滤器堵塞⑤进样阀损坏；⑥密封圈性能不好。

3、压力过高。①管路堵塞；②保护柱堵塞；③检测池堵塞，发生情况立即停泵，否则会损坏流通池。

四、与检测器有关的故障及其排除

1、流通池内有气泡。如果有气泡连续不断通过检测池，将其噪音增大。如有较大气泡，则会在基线上出现许多线状"峰"，可加大流量排出气体。如果检测池有停留的气泡，可采用突然增大流量的方法排除气体（不连接色谱柱）。

2、检测池被污染。检测池被污染了，可能产生噪音，或基线漂移，可以使用适当溶剂清洗，如果污染严重，就可以用1mol/l硝酸溶液、水和新鲜溶剂进行清洗。

3、光源灯出现故障。检测器的光远灯不能满足正常样品分析时，可能产生严重噪音污染，基线漂移，出现异常峰，甚至基线不回零。

4、出现倒峰。如果流动相有紫外吸收的杂质，使用紫外检测器时，就会产生倒峰，必须用高纯度的溶剂作为流动相。检测器的极性接反了，也会出现倒峰

出现倒峰可能原因有氘灯老化，流通管道或池不通畅，样品和流动相中含有小颗粒,气泡等，也有文献认为倒峰主要是水分引起。
甚至还有可能是溶剂峰，如果流动相有紫外吸收的杂质，使用紫外检测器时，就会产生倒峰。
用示差折光检测器时，如果组分的折光指数低于流动相的折光指数，也会出现倒峰。
此外，检测器的极性接反了，也会出现倒峰。
对于该谱图出现的情况，可以考虑使用流动相溶解稀释样品，这招效果蛮不错的；或者考虑改变检测波长。

2和3图比较，23.9分钟倒峰有可能是DAD类检测器参考波长设置不对（设置参考波长有吸收）引起。