主题：【资料】显微镜原理构造调试使用和保养

4. 透射光光源与反射光光源的转换开关（toggle switch） 这是新一代AXIO系列显微镜特有的装置，透
射光和反射光可通用。当具有透/反两用的配置时，利用这一转换开关能方便而又迅速的使透射光和反射光
互相转换。在纯透射光的配置中，这一开关就改为电源开关。
5. 电源开关（mains switch）与亮度调节旋钮（brightness control） 电源开关用来接通或切断显微镜所
需用的交流电源。电源开关旋钮也可调节照明光源的亮度，使所观察的视域可随时获得适当的亮度，可调范围为3-12V。作显微照相时，可根据曝光以及彩色底片色温的要求来调节灯光的亮度。当准备关掉电源
之前，应先将亮度调节旋钮调到最小。
6. 粗、微调焦旋钮（coaxial coarse/fine focusing controls） 调焦旋钮转动时带动燕尾导板上下移动，
而导板上则装有物台托架和聚光镜托架，从而使物台趋向或远离物镜达到调焦的效果。
7. 透射光用的滤光片选择按钮（push buttons for filter magazine） 透射光显微镜检方法所需用的一组滤
光片已安装在显微镜的底座内，通过底座外的按钮就可以根据不同的需要来选择适用的一块或一组滤光
片。通常的滤光片配套有：
(1) 蓝色色温转换滤光片：用来把光源的色温由3200K转换成日光型彩色底片所需
的5500K色温；
(2) 绿色滤光片：用来增强相差观察方法中成像的反差，或者以黑白底片作显微照相时，可以提高片成像
的反差；
(3) 浅灰色滤光片：是透光率为50%的中性减光滤光片，可把视野的亮度减弱一半；
(4) 灰色滤光片：是透光率为25%的中性减光滤光片，可把视野的高度减弱75%；
(5) 透光率仅为6%的中性减光滤光片，可把视野的亮度变得相当暗，95%以上的光都已被吸收掉。

8. 光源的视场光阑（luminuos field diaphragm） 视场光阑是显微镜照明光路系统中的重要部件之一，
它只能按照库勒照明系统的要求来进行调节，视场光阑不可以任意开大，但要根据使用的物镜倍数来调节
适当的大小。视场光阑的主要功用有：
(1) 控制杂散光在成像光路系统中的影响，特别是免除杂散光对照相系统的干扰，使显微照相的底片不至
于蒙上一层灰雾；
(2) 控制照明光束的大小，使所观察的视域能受到均匀的照明；
(3) 在荧光显微镜检方法中，可以把激发光限制在所需激发样品的视域范围内，以防止视域外的样品过早
受到激发。9. 聚光镜系统（condenser system） 聚光镜系统是照明光路系统中的重要部件之一，它也只能按照库
勒照明系统的调整要求来进行调节。聚光镜系统调整的好坏，可以直接影响显微镜视域中照明的均匀性，
也可影响显微镜的分辨力，还可以直接控制显微照相底片上的反差。聚光镜系统通常由以下几个部件组成：
(1) 聚光镜本体（condenser） 可以是简单的阿贝聚光镜，也可以是消球差-消色差的优质聚光镜，另外
还有一种是消除了内应力的偏光聚光镜。聚光镜的重要参数之一是数值孔径（NA），通常为0.32；这样
的数值孔径太小，只能与以下的物镜配合使用，因此需配用前端透镜来提高数值孔径，以便与不同倍数的
物镜灵活配合使用；
(2) 前端透镜（front lens） 前端透镜本身的数值孔径通常为0.63、0.90、1.30或1.40，它要附装在聚光
镜本体上，可以方便地摆进或摆出光路。最常用的前端透镜数值孔径为0.90，当它摆入光路时，可以和
10×及以上的物镜配用，摆出光路时可以和10×以下的物镜如6.3×、5×及2.5×等物镜配用；
(3) 聚光镜的孔径光阑（aperture diaphragm） 孔径光阑实际上是一个可变光圈，它是显微镜照明光路
系统中的又一个重要部件，在透射光明视野法、微分干涉相衬法以及偏光法所使用的聚光镜中，都装有孔
径光阑。它可以影响显微镜在作观察时的分辨力；直接控制显微照相底片上的反差；可用来调节聚光镜的
数值孔径，配合所用物镜的数值孔径，以取得最佳的分辨本领，或最大的分辨本领；还可以使光源的发光
体成像于孔径光阑所在的平面上，从而满足库勒照明系统的前提条件。
在实际操作中，调节聚光镜孔径光阑可以改变显微镜中所观察到的视野亮度，这是由于历史上对聚光镜孔
径光阑的误解所造成的错误用法。这里要特别强调：不应该用聚光镜的孔径光阑来调节视野中的亮度、更
不应该用调节聚光镜位置高低的方法来调节视野中的亮度！以往的错误用法希望能在实际操作中纠正过
来。

10. 机械移动式载物台（specimen stage） 载物台可以承载样品，装有可在水平方向上作前后、左右移
动的调节装置，有的还可以在水平方向上作大约100度的旋转，以便使样品能更好地与显微照相的取景框
相适配。
11. 物镜转换器（nosepiece） 物镜转换器安装在滑插式燕尾槽座上，已作了准确的对中。可迅速更换
物镜。常用的有6个、5个及4个孔位的物镜转换器。
12. 物镜（objectives） 物镜是显微镜的核心光学部件，显微镜的放大倍数、分辨本领、色差与像差的校
正状况、工作距离等，都有直接由物镜来决定。衡量物镜质量的基本参数主要有：a. 色差消正的程度（或
级别）；b. 像场平坦的程度；c. 所使用的玻璃材料。数值孔径（NA）是物镜最重要的参数，数值孔径越
大，分辨率越高。目前物镜的数值孔径最大只有1.30。按照物镜色差和像差校正的程度，物镜可以分为以
下类别：
(1) 消色差物镜（achomats） 通常对红光与蓝光两种色光作了色差校正，但视域中像场的平坦程度并未
作过完善的校正，因此只能作一般的观察应用。在偏光显微镜中，由于需要消除物镜内各个镜片的内应力，
反而需要利用这种镜片数目不多的物镜来做偏光物镜。
(2) 有限平像场消色差物镜（flat-field achromats） 这也是对两种色光作了校正的消色差物镜，但视域范
围内像场的平坦程度只作了有限范围内的校正，通常在显微照相取景框范围内像场是平坦的，以确保显微
照相对焦的清晰，取景框范围以外，往往不一定能保证同样的清晰度。适用于常规检验而又需要作显微照
相的工作中。
(3) 完善平像场消色差物镜（plan-achromats） 这也是对两种色光作了校正的高级消色差物镜，主要特
点是像场在整个视域中作了完善的校正，适合于作要求较高的显微镜检工作，特别是作显微照相效果更好。
由于这种物镜仍采用常用的光学玻璃，不适宜作荧光等这一类弱光的观察和照相。

(7) 完善平像场萤石消色差多种介质浸没式物镜（ plan-neofluar imm.） 这是一种新型物镜，采用萤石
玻璃制造其中全部或部分镜片，成像质量特别明亮，反差十分好，色差接近于复消色差，因此又属于半复
消色差物镜。数值孔径特别大，透光能力强，而且分辨率十分好。最大的特点是可用好几种浸没介质，如
常用的浸没油、甘油、蒸馏水等，既可使用权盖玻片也可以不使用。这种物镜制成干式物镜时，可加上校
正环，用来校正盖玻片的厚度不均匀性，以消除盖玻片厚度不规则造成的成像失真，对于厚度在
0.12-0.22mm 之间的盖玻片都可以作相应的校正。
1986年以来，德国蔡司公司推出的新一代光学显微镜，其中的物镜突破了传统光学显微镜的概念，采用
了无限远色差校正的光学系统（infinity color-corrected system，简称ICS物镜），其特点是：由物镜射出
的成像光束是一束平行光，可在成像光路中按需要插入任意多的光学部件而不影响成像质量。在显微镜镜
体内有一特制的镜筒透镜（tube lens）与物镜相配，两者结合起来把物镜的色差与像差都作了十分完善的
校正，而且物镜的视域相当宽阔，比传统物镜的视域扩大约40% 。
13. 荧光滤光片组插板的插口（slot for the fluorescence slider） 这是为作荧光观察时插入荧光滤光片组
插板预留的插口。
14. 勃氏镜插板的插口（slot for Bertcand-lens slider） 这是为作偏光观察时插入勃氏镜插板预留的插口，
勃氏镜是偏光显微镜中用作锥光干涉图试验的重要部件。
15. 补色器插板的插口（slot for auxiliary objects） 这是当作微分干涉相衬观察和偏光需加入的各种补色
器预留的插口。
16. 双目镜筒或带照相镜筒的双目镜筒（binocular tubes or binocular phototubes） 用来安放目镜及照
相装置。为便于观察，镜筒制成具有一定倾斜角度（30°或45°），设有瞳距调节装置，可在55°至75°范
围内调节，以适合不同使用者两眼瞳孔距离。双目镜筒内装有一些折光和分光棱镜，能把从物镜出来的一
束成像光束等分成两部分，分别由两个目镜作观察。带照相镜筒的双目筒一般在右测装有光束分配棱镜的
拉杆，把它全部推入时只作观察，拉出来则一边观察一边照相，或全部作显微照相。
17. 目镜（eyepieces） 目镜是显微镜中把物镜所成的像作再一次放大的光学部件，显微镜的总放大倍数
通常就是物镜与目镜放大倍数的乘积。为方便不同视力者进行显微拍照时调焦同样清晰，一些目镜设计成
可调焦式。为了使显微镜获得最大有效放大倍数和最高分辨本领，必须合理选配目镜。到目前为止，由于
受光学定律的制约，光学显微镜最大的有效放大倍数为1250-1300倍。10×目镜是最常用而必须配备的目
镜，观察荧光时最好选用10×以下的目镜。

在了解了显微镜各主要部件的名称、构造和功能之后，为了更好地发挥显微镜的各种功能，提高工作
效率，保证在显微观察及显微照相过程中取得最佳效果，使用人员必须了解和掌握显微镜正确的调试方法和使用方法。尤其在新一代显微镜中，具备了多种功能，能进行多种显微镜检方法观察，正确的试调方法
和使用方法就显得尤为重要。下面以Axioplan万能研究显微镜为例，简述调试及使用方法。
1. 显微镜照明光路系统的调整 为了使显微镜的视野能受到均匀而又充分的照明，在显微镜初次安装和调
试时，就必须把照明光路系统调整好，这是正确使用显微镜，并获得正确、可靠结果的重要手段和最基本
的要求。此外，正确掌握照明光路系统的调整，是使用显微镜过程中更换光源灯泡后所必经的步骤，也是
在日常使用过程中不时地检验显微镜性能的必要手段。显微镜照明光路系统的调整主要有以下4项内容：
(1) 照明光源灯室在显微外的初步调整
① 首先将灯室的外壳打开，压弹簧夹子将卤素灯泡装入插座中，安装时避免手指直接接触灯泡（可用柔
软的布或纸隔住），以免灯泡上留有指纹等脏物，影响灯泡的使用寿命。
② 把灯室摆在桌面上，接通电源后，用专用的螺丝刀调节灯的调焦旋钮孔（标有“←→”），使灯丝投影在
1-2m 外的墙上，将灯丝成像调至清晰；然后调节灯的高低位置调节丝孔（标有“──”），使灯丝位置高低
适当；再调节灯的左右位置调节螺丝孔（标有“──”），使灯丝左右位置合适。(2) 光源发光体（灯丝）在显微镜内位置的检验和校正 目的是为了把发光体的像端端正正地调入物镜的
视域范围内，从光源的角度去确保显微镜的视域受到充分而均匀的照明，这是调整库勒照明系统的前提条
件。
需要的基本工具：对中望远镜购置显微镜时已配备。
① 拔掉灯库内的毛玻璃套筒，把灯室装回显微镜上；
② 选用10×物镜，开亮光源程序找样品并调焦清晰，再换用40×物镜把样品调焦清
晰（40×物镜可以看清灯丝的全貌）；
③ 把聚光镜的孔径光阑和视场光阑均开到最大；
④ 拔掉其中一个目镜，换上对中望远镜，抓住白色部分，另一手伸缩黑色接目镜，就可在视野中看到灯
丝像；
⑤ 如灯丝位置不合适，调“──”孔，把灯丝像沿水平方向调好，调“──”孔，把丝像沿垂直方向调好，直至
将灯丝像调至刚好充满物镜孔径的光圆像；
⑥ 调整完毕后，将毛玻璃套筒插回原位，拔掉对中望远镜，换回目镜作下一步调整。
以上所述照明光源灯室在显微镜外的调整和光源发光体在显微镜内位置的校验，只需在显微镜初次安装调
试及更换灯泡时进行，平时使用显微镜时不能随意乱调乱动。万一调乱时，可按上述步骤调回原状。
(3) 库勒照明（Kohler）系统的正确调整 显微镜的正确调试，主要工作之一是照明光路系统的调整，而其中的关键是库勒照明系统的调整。对于每一位使用显微镜的人员，特别是作显微照相的人员来说，应该对库勒照明系统的原理及其调整步骤有一定的了解和掌握，才能充分发挥显微镜应有的功能，拍出来的照
片才能在效果上比较一致而又完善。
库勒照明系统的原理简单来说就是：光源发光体上任意一点发出的光，可以照明显微镜的视域范围，而光
源发光体上每一点所发出的光汇集起来，在显微镜的视域中就实现了非常充分而又均匀的照明。
调整库勒照明系统的目的，是为了使所观察的视域能获得均匀而又充分的照明，防止杂散光对照相系统造
成影响或干扰，以免照相时在底片形成灰雾。高调整库勒照明系统的必要部件：视场光阑、可进行合轴调
整的聚光镜系统。
① 选用10×物镜和10×目镜；
② 把聚光镜前端透镜摆进光路中，孔径光阑调至适中的位置上（不大不小），再把聚光镜升到最顶的位
置上，聚光镜转盘调至明视野“J”位置；
③ 把视场光阑调至最小（0.1）；
④ 载物台上放上已封片的生物样品，开亮光源，调焦清晰；⑤ 视域中会出现一个局部照明的区域或亮斑，这是视场光阑的模糊像，在其中可以清晰地看到样品的细
节；在它之外是较暗的视域，不一定能把样品的细节看得清楚；
⑥ 把聚光镜微微地向下调，使视野中的亮斑逐渐收小，慢慢变成一个清晰的多边形象，这便是视场光阑
的清晰像；
⑦ 一般情况下，多边形象并不在视域中央，需要调整聚光镜的一对调中螺丝，把视场光阑多边形的像调
至中央位置；
⑧ 逐渐开大视场光阑，使多边形象成为视域的内接多边形，进一步核对调中的状况，如对中不够理想，
继续微微调对中螺丝；
⑨ 将视场光阑稍为再微微开大一些，使它的多边形象恰好消失在视域的边缘上，至此，库勒照明系统调
整完毕。
库勒照明系统调整好以后，整个视域照明均匀，拍摄的显微照片明亮清晰，反差正常。在日后使用过
程中应特别注意：
a. 视场光阑不可任意开大，但可随物镜倍数的增大而将视场光阑收小，随物镜倍数的减小而开大；
b. 聚光镜的高低位置不准乱调，否则会破坏已调整好的库勒照明系统；
c. 使用10×以下物镜时要将聚光镜前端透镜摆出光路外，使用10×或10×以上物镜时要将前端透镜摆入光
路中；d. 关于物镜倍数与视场光阑大小配合问题，在实际使用过程中，作为一般观察不一定要收小或开大视场光
阑，但作显微照相时，为了避免杂散光线对照相系统的干扰，以便能拍摄到较完善的照片，则应在使用每一个倍数的物镜时，把视场光阑调节到正好消失于所观察的视域边上，这是比较繁复的工作，但又非做不
可。较为简便的方法是把与各个倍数物镜相对应的视场光阑事先调整好，并作好记号，以后使用时根据记
号直接调至相应的位置。
(4) 孔径光阑的正确使用 由于聚光镜的孔径光阑可以影响显微镜的分辨率，使用时应掌握正确的使用方
法。过去由于对孔径光阑的认识不足，往往把它当作是调节视野亮度的工具。虽然调节孔径光阑在一定程
度上可以改变视野的亮度，但会直接影响成像的反差、对比度及分辨率，在使用过程中应尽可能避免。
为了发挥聚光镜孔径光阑的作用，以便在观察时，尤其在作显微照相时获得最佳分辨率，在每换用一个倍
数的物镜时，在样品调焦清晰后，需要调节孔径光阑，使它的大小正好等于所用物镜数值孔径（物镜孔径
像）的2/3 。
调整方法是用对中望远镜对焦于视野中黑色相差环上，调节孔径光阑，可以看到一个多边形的孔径光阑像，
然后调到等于物镜孔径像的2/3，即介于黑色相差环外与圆形视域内之间。为方便起见，可把与各倍数物
镜相对应的孔径光阑预先调整好，并作好标记，以免每次使用都要重新调整。

2. 显微镜成像光路系统的调整及显微镜检术概要 显微镜成像光路系统的调整，是根据不同显微镜检术的
需要而进行的。所谓显微镜检术（microscopy），概括而言就是以显微镜观察样品时所使用的照明方法，
以及如何使样品所成的像能获得更良好反差的技术与方法。以下简述显微镜检术中已成熟的几种方法及对
应的显微镜成像光路系统的调整方法。
(1) 透射光明视野（brightfield） 这是自显微镜发明以来最传统、最普遍的应用方法。
基本部件：
a. 物镜：任何物镜都可作明视野观察；
b. 聚光镜：各种聚光镜均可，最好配有孔径光阑。
调整方法：在上述显微镜的库勒照明系统调整好后，即可应用明视野法。
适用范围：所有已染色的组织切片、血液涂片等。
注意事项：
a. 使用明视野方法观察时，一定要将库勒照明系统调整好；
b. 视场光阑不可任意开大，使用10×、10×以下和10×以上物镜时，要将聚光镜前端透镜分别摆事实出和
摆进光路中；
c. 不可用聚光镜的孔径光阑来调节视野的亮度，更不要乱调聚光镜的高低位置，否则，会降低显微镜的分辨率和破坏已调整好的库勒照明系统；
d. 作显微照相时，每换用一个倍数的物镜，就要调节聚光镜的孔径光阑，使它的大小正好等于所用物镜数
值孔径的2/3 。(2) 透射光相差法（phase-contrast） 这是现代显微镜检术中的一种反差增强法。
基本部件：相差物镜、明视野与相差兼用的多用途聚光镜、对中望远镜、绿色滤光片。
调整方法：
a. 在库勒照明系统调整好的基础上，用明视野方法把样品调焦清晰；
b. 把聚光镜转到Ph1对准转盘刻度线位置，选用10×相差物镜，换上待观察的透明样品； c. 拔掉其中一
个目镜，换上对中望远镜，并调焦于视野中的两个相差环上（物镜的黑色相差环和聚光镜的透光相差环）；
d. 视野中的两个相差环不一定重合，调节聚光镜上的两个调节装置（调整相差环左右位置的调节杆和调整
前后位置的摩擦式转钮），使透光环作前后左右移动而与黑环重合；
e. 调整好后，换回观察用目镜，将绿色滤光片按入光路中，即可观察到样品的相差像；
f. 有20×和40×物镜观察时，聚光镜应设在Ph2位置上，用100物镜时，聚光镜应设在Ph3位置上。
适用范围：适用于观察透明、未染色或不能染色的样品，如各种细胞、活组织、未染色或不染色的组织切
片、水生生物等。
(3) 微分干涉相衬法（differential interference-contrast，DIC） 为了克服相差法观察时样品细节像周围
伴随有光晕，会掩没掉本来应该看见的细节，以及样品或组织切片厚度要求相当薄，原则上下能厚于10?m
等局限性，利用双光束干涉的原理设计子微分干涉相衬法。
调整方法
a. 必须在库勒明系统已调好的基础上才能调好DIC方法；
b. 先用10×物镜，以明视野先确定好能把样品看清晰的物镜调焦位置；
c. 把起偏器（polarizer）摆入照明光路中，注意其取向应为东—西方向；
d. 把聚光镜转盘转到与10×物镜对应使用的位置上，即DIC 0.3—0.4；
e. 在物镜后方或物镜转换器上插入10×物镜使用的DIC 插片（DIC slider）；
f. 把检偏器（analyser）插入成像光路中，注意其取向应为南—北方；
g. 换上待观察的透明样品，开亮光源把样品调焦清晰；
h. 调节DIC 插片，使微分干涉相衬的像达到最佳效果，也就是浮雕效果最为明显；
i. 同时可调节聚光镜的孔径光阑，使反差的效果也达到最佳；
j. 然后再细微调样品的细节，可见样品中不同层面上的结构；
k. 如果把补色器（first order red retardation plate）插入，并同时调节DIC 插片，可在视野中看到不断变
化的绚丽色彩，红、橙、黄、绿、蓝、紫、粉红、粉紫及金黄色都具有。适用范围：透明或不能染色的组织切片，厚度可达100?m 左右，培养中的活组织和活细胞、小生生物等。

(4) 落射光激发的荧光法（incident-loght fluorescence Epi-FL） 简称为落射荧光法，是近代显微镜检术
中新发展出来的一种强有力的反差增强法。它将激发荧光用的光源改在物镜的上方，光由物镜上方经反光
镜射入物镜去激发样品，从样品上被激发的荧光经物镜成像并穿透反光镜而由目镜观察。该方法较简便，
效率高，50W 的光源强度比透射荧光法的250W 还强。
荧光方法是利用波长较短的紫外光、紫光、蓝紫光、蓝光及绿光等去激发样品，只要样品中含有可产生荧
光的成分，它便吸收短波的激发光而释放出波长较长的荧光。不同物质只能吸改特定波长的激发光，而释
放的荧光也会有特定的波长，因而用作特异性的鉴定十分有效，如某些致病的细菌和螺旋体，受紫外光激
发后能发出它们特有的荧光，很容易作出鉴定，这种利用物质吸收激发光后放出特有荧光的方法称为自发
荧光法。某些物质自身不会吸收激发光，或吸收后不能释放荧光，但可以吸收或吸附特定的荧光色素或染
料，而这些特定的荧光色素或染料也只能吸收特定的激发光，再释放出特定的荧光，从而间接地鉴别出某
种物质，这称为间接荧光法。上述荧光方法广泛应用于医学、生物学及工业的特异性研究和鉴别上。调整
方法：荧光显微镜或附有荧光部件的显微镜，调整的方法大致相同。
① 汞灯的安装
a. 打开包装，取出汞灯将其小心安装在上电极散热帽上，安装时注意手指不能直接接触灯管和散热帽的正
面，汞灯的封气口要对向散热帽的左侧或右侧；
b. 把汞灯的上电极引张安装并固定在散热帽底面的小孔上，再把汞灯的下电极及上电极引线另一端，分别
安装在灯座上各自的插孔中并固定；
c. 锁紧散热片上的螺丝后，把汞灯连同灯座及散热帽小心装入灯室中，锁紧相应的螺丝，再把灯座上的连
线和插座插到汞灯电源后部专用的插座上。
d. 详细的安装方法请参照有关说明书。
② 汞灯灯室在显微镜外的初步调整：
a. 接通汞灯电源，让汞灯预热10-15min；
b. 把汞灯灯室摆放在桌面上，让汞弧投影到2-3m 外的墙上，划一条与灯室窗口中心线对地高度一样的水
平线作为参考线；
c. 转动灯室调焦旋钮，使汞弧的像清晰地投影于墙上；
d. 分别调节灯室外壳上的5个调节螺丝孔，把汞弧的像其反射像调成并排且尽量靠近，但不要重叠在一起。
③ 汞灯汞弧在显微镜内位置的检验：
a. 将汞灯照明光路系统中的视场光阑开到最大；
b. 把荧光滤光片组推到蓝光激发的位置上，以避免汞灯中的蓝光太刺眼；
c. 把观察的样品或一块载玻片放在物台上，盖上一张比盖玻片稍大且洁白的薄纸；d. 取下一个物镜，使激发的蓝光经物镜转换器的空档照在白纸上，白纸上会有一蓝色的圆形照明区域，汞
弧的像及其反射像都应该出现在这区域的中央部位，否则，可调节灯室调焦旋钮至最清晰，然后分别调节
灯室外壳上的5个调节螺丝孔，直至汞弧的像及其反射像并排在照明区域的中央位置。
e. 调好之后，把物镜装回去，通过目镜可见白纸被蓝光激发后发射出的黄绿色荧光；
f. 仔细调焦，可看清白纸的纤维；取去白纸，样品上的荧光细节隐约可见而很容易调焦清晰。
④ 汞灯使用注意事项 目前通常使用的为50W 超高气压汞灯，灯管内通有一对钨电极和液态汞（室温下
附在管壁上），未点燃时，管内气压很低，在灯管的两电极间施加电压角发点燃后，汞气化为汞蒸气形成
汞弧而产生强光，温度升高，管内气压迅速升到10个大气压。由于是高气压的气体放电，必须了解其特
性才能安全地使用汞灯。
a. 汞灯接通电源后需要10-15min预热时间，汞才能充分汽化并形成汞弧，产生高亮度而稳定的激发光。
因此，观察前要提早通电；
b. 汞灯在使用过程中，不要随意开关汞灯的电源；

c. 关掉汞灯电源后，必须等待15-20min，待汞灯自燃冷却后才可再次接通电源，违反这一操作规定时，
将会造成严重后果！
由于汞灯内的汞蒸气未完全液化，汞蒸气内阻很小，一旦通电在两电极间施加电压，汞灯内形成强大的电
流，轻则烧断保险丝或烧毁汞灯电源中的扼流圈，重则汞灯爆炸，汞蒸气弥漫整个实验室，造成工作人员
中毒，不仅损失了汞灯，还会炸毁灯室内的集光-聚光部件。
d. 汞灯的使用寿命一般只有300h，使用得当可达600h，使用寿命与开关的次数成反比，应集中一批样吕
作2-3h的观察。汞灯价格及昂贵，应珍惜使用。
e. 汞灯寿命终结的标志是点燃困难，灯管发黑。
5. 暗视野法（dark field） 许多透明或半透明的样品，如细菌、微生物、细胞内的精细结构及结晶体的内
含物等，在明视野显微镜中不容易看清楚，如果采用暗视野法就可以大大提高样品的可视度。以暗视野法
所看到的是衬托在黑暗视野背景中发亮的样品轮廓及其细节。
普遍光学显微镜的最高分辨率为0.2?m，而暗视野显微镜虽然对样品的细节构造分辨不清楚，但却可看到
0.004?m 以上微细颗粒的存在，即可以看到亚显微结构，特别适合用来观察微细的颗粒与细菌等。
调整方法：暗视野法的主要必需部件是暗视野聚光镜。使用时须先用明视野聚光镜把库勒照明系统调整好。
换上暗视野聚光镜时，要把载玻片（样品）移开，将浸没油滴在聚光镜顶部，再把样品载玻片搁在物台上，
浸没油便充填在两者之间，这种聚光镜须与装有可变光阑的100×油镜配用。另一种中倍率干式暗视野聚光镜可与中倍率的物镜配用，这种聚光镜具有中央光挡，照明光只能透过光档与聚光镜边缘之间的透光环
才能进入聚光镜内。对于配备齐全的相差显微镜，与编号为Ph3物镜配用的相差聚光镜相差环，可以和 10×及10×以下的相
差物镜配用而形成低倍率的暗视野效果

显微镜是一种精密的光学仪器，价格普遍较高。从结构上看，显微镜由许多光学部件和较精密的金属
零件组成，在使用过程中应特别注意做好保养工作。
1. 严格按照有关操作规则使用显微镜，避免因使用不当造成损毁。
2. 显微镜在储存和使用过程中，普遍存在着生霉起雾问题，霉和雾会使显微镜的视场模糊，分辩率下降。
为了使显微镜保持良好的工作状态，延长使用寿命，显微镜的工作环境应保持清洁、干燥、防尘。
3. 显微镜在每次使用完毕后应及时做好清洁工作，特别是目镜、物镜等容易污染的光学部件，如发现表现
表面有灰尘、指纹、脏物等，应及时用镜头纸清洁干净。
4. 显微镜工作室最好能安装空调、抽湿及防尘装置。
5. 如发现光学部件内部有生霉等现象，最好及时联系有关厂家派人清洁、维修