主题：【分享】欧盟兽药检测方法（之二十二）

高效液相色谱法分析蛋、奶及肉中的硝基呋喃类药物残留(EEC,确证法 )
HPLC Analysis with A Dialysis Method for Determining Residues of Nitrofurans in Eggs, Milk and Meat
（EEC，Cy 3.9 Confirming Method）

安全操作注意事项及急救：
有机溶剂：所有有机试剂必需注意其潜在危害。对有机试剂的所有操作均应在通风橱中进行。

引言
硝基呋喃类药物（这里指呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃旦啶和呋喃它酮）作为抗菌剂用于养猪业和养禽业。

1 主题内容
本工作是按照残留参考（86/496/EEC）要求开展的。

2 应用范围
本方法适用于检测蛋、肉和奶中硝基呋喃类药物的检验，本方法在荷兰的RIKILT使用。作为一种常规检测方法每天分析约30个样品，它也可用作确证方法，其检测限范围为1~10 g/kg。

3 参考文献
委员会决议，93/256/EEC
2052/VI /84 File 6.11 II—4
ISO标准78/2）—1982 制定标准—第二部分：化学分析标准
ISO标准5785（1986）
Aerts,M.M.L,Beek,W.M.J.and Brinkman,V.A.Th(1990),
J.Chromatogr,500,453-468 可食产品中硝基呋喃的测定。

4 定义
硝基呋喃类物质含量是指按所述方法测定蛋、奶及肉中硝基呋喃类物质的量，以 g/kg来表示。

5 原理
本方法包括四个步骤，所有的操作应在暗处避光操作：
—脱脂奶在盐溶液中混合，肉和蛋在盐溶液中均质
—离心
—上层提取液的纯化
—用HPLC UV 检测器在365nm处定量

6 材料
6.1 化学试剂
6.1.1 氯化钠
6.1.2 甲醇、分析纯
6.1.3 丙酮、分析纯
6.1.4 乙腈、色谱纯
6.1.5 叠氮化钠
6.1.6 醋酸钠
6.1.7 冰醋酸
6.1.8 去离子水，经Milli-Q纯化过滤
6.2 溶液
6.2.1 0.9%NaCl水溶液
6.2.2 1%叠氮化钠水溶液
6.2.3 10%叠氮化钠水溶液
6.2.4 0.1mol/L醋酸钠-醋酸缓冲液，pH5.0
6.2.5 HPLC洗脱液；80mL 醋酸缓冲液（6.2.4）和200 mL乙腈（6.1.4）混合
6.3 硝基呋喃标准品
呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃旦啶 和呋喃它酮由 提供。
6.3.1标准溶液：100 g/mL硝基呋喃类标准于丙酮-甲醇（1+1）中，避光4℃储存。一个月内有效。
6.3.2 标准工作液为10 g/mL硝基呋喃标准/mL盐溶液（6.2.1）。当日制备。

7 仪器设备
7.1 玻璃器皿
7.1.1 刻度移液管
7.1.2 离心管
7.1.3 试管可盛6mL样品
7.1.4 一般实验玻璃器皿
7.2 仪器
7.2.1 自动移液器
7.2.2 分析天平
7.2.3 冷冻离心机
7.2.4 冰箱。温度<-18℃
7.2.5 旋涡混匀器
7.3 分析仪器
自动样品透析装置是一种改进的Gilson ASTED 系统，包括231自动进样器。2个配有5mL和1mL注射器的401型稀释器和2个多聚（异丁烯酸甲酯）平板透析块。配有 Cuprophan膜（10,000~15,000 Daltons）。其给予体容量分别为100 L和370 L，接收体容量为分别175 L和165 L。
分析块的组成和选择取决于分析物质的体积。
7.4 HPLC仪器
无级泵（Gilson 302/5 型）配有783型检测器，检测波长365nm，自动六口阀（7010型Rheodyne）或转换阀（Muet Spark,Emmen）或自动进样器（231型 Gilson）。色谱峰由自动积分仪（C-R2A，Rhimadzu）或Kipp-dd-u1记录仪记录。所有时间由ASTED控制器控制，预柱用60mmX4.6mm（id）柱填有20 m过滤器板和37-50 um Bondapak C18/Corazil(Millipore)。色谱柱为250mmX4.6mm(id)膜厚5 m的Hyperzil ODS柱，流动相（6.2.5）流速为1mL/min。
7.5 均质器：400型实验室搅拌器
7.6 配有黄灯光的暗室。