主题：【转帖】免疫检测中的基础知识、实验操作步骤、影响因素及质量控制。

免疫检测的实验室质量控制（Quality Control，QC）概述


        实验室质量控制
从1949年美国College of American Pathologists（简称CAP）首先开始研究临床实验室室内质量控制（简称质控）问题，美国学者Levery和Jenning于1950年发表第一篇关于使用质控图的实验室室内质控，临床检验实验室的室内质控工作正式拉序幕。
　　到70年代，实验室质量控制进入一个新的阶段--全面质量管理，推行Good Laboratory Parctice（简称GLP）。进入80年代末期，GLP的统一标准产生了，发展到"认证实验室"管理阶段。
　　全面质量管理的宗旨在于预防差错的产生。质控图的统计学质控的目的是检出差错。统计学的实验室室内质控是全面质量管理中的一个重要环节。
　　卫生部临床检验中心免疫质控室从1988年开始在全国范围内开展乙肝标志物检验的质量评价活动，一直采用这一套质量评价方法，并在实践中不断实践、提高和完善，希望能找出一条适合中国国情的，行之有效的质量管理的道路。
英国 Whitehead 教授建议生化检验工作的质量控制分为4 个步骤：最佳条件的变异（OCV）；常规条件的变异（RCV）；病人结果的统计（SPR）；室间质量控制（EQA）。前三个步骤即室内质量控制（IQC）。
在GLP 概念里QC 即指IQC，其定义为：由实验室工作人员采取一定的方法和步骤，连续评价本室工作的可靠性，旨在监测和控制本室常规工作的精密度，提高批内批间样本检验的一致性，以确定检验报告是否可靠或可否发出的一项工作。
免疫测定方法的灵敏度和特异性要比生化方法高得多，因此QC 手段不能照搬生化模式。分为定性和定量二个方面。
        免疫测定方法的定性试验质量控制
ELISA 定性试验的临床意义在于是否检出病原体，与检出量无关，因此QC 要保证试验的灵敏度和特异性。生化的质控图方法仅能观察灵敏度而无法监控特异性。
建议使用临界值血清界定法：将试剂盒所设的阴阳性对照作为内对照指示反应；另设临界值、高值质控血清，正常人血清作为外对照，与标本同时检测，临界值S/C.O≥1，高值质控血清 S/C.O≥10，正常人血清A 值在0.05~0.07 之间。
◎阳性质控血清失控（临界值为灵敏度，高值为"HOOK" 效应监控）应重做阴性标本；阴性对照失控应重做阳性标本。
◎以表格式记录每块板的外对照实验结果，作为QC 资料存档。
        免疫测定方法的定量试验质量控制
ELISA 定量试验常见于肿瘤因子（如AFP，CEA，CA 系列），激素类，免疫球蛋白类，这些物质在体内有一定的量（正常范围），超出这个量才呈病理情况，故需定量测定。定量试验的质控方法可参考生化方式。
"即刻性"质控：在开始进行质控时，只需要有3 个质控血清测定值即可进行质控。当这组数据扩大到20 次有效值时就可以计算RCV 的X，s。方法：
（1）先将测定值从小到大排列，X1 最小，Xn 最大；
◎（2）计算X 和s；
◎（3）计算SI 上限值和下限值。
◎SI 上=（X 最小-X）/S， SI 下=（X 最大-X）/S
◎对照SI 表，检查是否出控，
SI 上、下限≤规定值，在控；
SI 上或下限>规定值，失控。

分析前质控

l        分析前质控

人员培训实验是人操作的，因此检验人员需经过培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识：

◎检验项目的基本原理（ELISA 原理）；

◎临床意义；

◎熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点；

◎熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片段及其组成）；

◎ 熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。

◎某些特殊项目的检测如抗HIV 等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。

◎ELISA 原理：1971 年Engvall 等人把免疫组化的EIA 技术应用于临床检验发展为ELISA 技术。

特点：在固相表面组装免疫活性物质形成"免疫吸附剂"

酶标记免疫活性物质，进行信号放大；

有二步温育反应二次洗涤过程；

灵敏度特异性相对较高。

局限性：只能检测到ng 水平

精密度差（批内CV15-20%）；

线性范围窄（一个数量级）；

存在"HD-HOOK" 效应。

l        试剂盒选择

以乙肝检测为例，卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品，试剂应从灵敏度，特异性，精密度，稳定性，简便性，安全性及经济性作出全面的评价。

◎灵敏度：有二层含义，1）为试剂检出被检物质的最低量的能力；2）为试剂对人群或大量样品中阳性检出的能力（假阴性越少越好），取决于包被物的全面性。

◎特异性：指试剂正确检定不存在的被检物质的能力（无假阳性），取决于包被抗原（体）及标记抗原（体）的纯度及特异性。

◎精密度：ELISA 试剂一般指其批内CV，其值应小于15%；定量试剂应同时考察线性范围

◎稳定性：试剂在规定条件下能储存的时间，一般采用破坏性试验即将试剂存放于37℃保存，定期测定其灵敏度，特异性和精密度等指标，直到其质量指标开始下降为止，通常认为37℃每稳定一天相当于4-10 ℃保存一个半月。

◎简便性：指在不影响试剂的前三项指标的前题下，实验和测定步骤越少越好，在定性试验中结果判断简单明了，）定量试验结果计算也应简单。

◎安全性：指试剂对操作者和环境安全无害无传染性。

◎经济性：试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本而市场价格比较合理。

l        仪器质控

为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（SOP），所要控制的仪器包括移液器（加样枪），水浴箱（温箱），洗板机和酶标仪。

◎移液器：ELISA 加样量小（5-100ｕl），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在±10%以内；

◎水浴箱经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有±1℃的误差；

◎洗板机每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul ，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；

◎酶标仪经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。

l        酶标仪校正程序

◎滤光片波长精度检查：将不同波长的滤光片从酶标仪上卸下，用UV-2201 型紫外-可见分光光度计（波长精度±0.3nm）于可见光区对每个滤光片进行扫描，其检测值与标定值之差为滤光片波长精度。

◎通噵差与孔间差检测：通道差检测是取一只酶标板小孔杯（杯底须光滑，透明，无污染以酶标板架作载体，将其（内含200ul 甲基橙溶液吸光度调至0.500A 左右）置于8 个通道的相应位置，蒸溜水调零，1 于490nm 处连续测三次 ,观察其不同通道的检测器测量结果的一致性，可用极差值来表示。孔间差的测量是选择同一厂家，同一批号酶标2 板条（8 条共96 孔）分别加入200ul 甲基橙溶液（吸光度调至0.100A 左右）先后置于同一通道，蒸溜水调零,于490nm 处检测，其误差大小用±1.96s 衡量。

n 零点飘移（稳定性观察）：取8 只小孔杯分别置于8 个通道的相应位置，均加入200ul 蒸溜水并调零，于490nm 处每隔30 分钟测一次，观察各个通道4 小时内吸光度的变化。

◎精密度评价：每个通道3 只小杯分别加入200ul 高中低3 种不同．浓度的甲基橙溶解，蒸溜水调零，于490nm 作双份平行测定，每日测二次（上下午各一次），连续测定20 天。分别计算其批内精密度，日内批精密度,日间精密度和总精密度及相应的CV 值。

◎线性测定：用电子天平精确称取甲基橙配制5 个系列的溶液，于490nm 平行测8 次，取其均值。计算其回归方程，相关系数及标准估计误差s，并用±1.96s 表示样品测量的误差范围.双波长测定评价：取一分甲基橙溶液，分别加入3 种不同浓度的溶血液（测定波长为490nm，校正波长为585nm），先后于8 个通道检测，每个通道测3 次，51 比较各组之间是否具有统计学差异，以考察双波长消除干扰组分的效果。

◎一般酶标仪无585nm 滤光片，可选用550nm 或630nm 滤光片。450nm 滤光片的检定选用普鲁兰溶液（校正波长为630nm）

l        试剂盒评价

◎试剂评价需要有权威的血清考核盘（ Panel）进行检测，一般实验室不易从生检所或临检中心取得，每进一次试剂评价一次也很麻烦。可以通过间接的信息对试剂进行选择。

◎根据该试剂生检所批批检定报告，了解其质量水平，按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂；

◎通过询问试剂包被物的组成，如原料来源（基因工程或合成多肽），片段的组合（按比例混合或化学合成）， 片段的长短等判断试剂的优劣；

◎参考室间质评评价报告中对试剂的评价结果，这比较客观公正，因为统计数字均来自各参评医院，反映了试剂在某一地区的使用情况；

◎根据权威部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣。

l        标本的采集和保存

◎可用作 ELISA 的标本十分广泛，体液（如血清，血浆，各种积液），分泌物（如唾液）和排泻物（如粪便，尿液）均可作为标本以测定其中的抗原或抗体成分，一般使用血清。

n 标本采集时应尽量避免溶血，因红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质干扰立可读方法的结果，可造成假阳性；长菌的标本同样的道理易产生假阳性。

◎抗凝不完全的标本因纤维蛋白元的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是用肝素抗凝剂。

◎标本在冰箱中保存时间过长易导致血清IgG 聚合，使间接法的试剂本底加深，一般血清置4℃冰箱5 天内完成测试。如需保存一周以上则要-20℃冰冻保存，融解时应上下颠倒充分混匀，同时避免气泡。

◎ELISA 的灵敏度>1ng/ml 水平上,标本间的污染要尽量避免，尤其不应与生化试验用同一管标本.最起码应先做免疫后做生化。

分析中质控

ELISA 实验的结果受操作影响很大，每个步骤包括加样，温育，洗涤，显色，酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥ELISA 的高灵敏，强特异的优点。因此,应建立实验项目的标准操作程序(SOP)。

l        加样

◎加样应用微量移液器（加样枪)按规定的量加入微孔板的1/3 处避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。

◎每次加样应更换吸嘴，做到一人一吸头，以免发生交叉污染;干吸头预先在血清中抽吸三次。

◎样本稀释，目的是为了减少非特异性反应，所以一定要先加稀释液后加样本，特别注意加样后要在微量振荡器上振荡30 秒钟，同时注意防止液体溢出。如后面操作步骤中加二种以上试剂时均需振荡混匀。

◎如用滴瓶滴加试剂应先将滴瓶摇匀并挤去第一滴有气泡的试剂后加样。

l        温育

◎抗原抗体反应需要在一定温度下（37°C），经过一定的时间才能达到反应的平衡点

◎ELISA 边缘效应是由温育形成的。所以温育一般采用能使反应液温度迅速达到平衡的水浴法。一种放在水浴箱的隔板上，另一种是放在温箱的湿盒里。水要浸至板条的1/3 处，不可将板条叠加放置。

◎边缘效应（2ng/mlHBsAg 一步法三种不同温育法的结果）

l        洗涤

◎ELISA 是靠洗涤来达到分离结合与未结合抗原抗体复合物及酶标记物的目的，同时洗涤也可将非特异吸附的蛋白质的干扰以及血球、细菌中的酶干扰清除掉。

◎手工洗涤一般采用浸泡方法：1）甩去孔内反应液；

2）用洗涤液过洗一遍（即注满孔后即甩去）；

3）微孔重新注满洗液后浸泡2-3 分钟，间歇摇动；

4）甩去孔内液体，拍板，用纸吸干。

重复以上操作至少5 次。注意各种试剂盒的洗涤液尽量不要混用。

◎洗板机洗板一定要预先把板架放平，使洗板机上的每个放液和吸液纤孔都能一致地插入孔底，将孔内液体全部吸干，同时要设置一定的浸泡时间。如出现机洗后拍板有较多残留液时应再用手工洗2 次以上。关机前要用蒸溜水冲洗管道，避免堵孔。

l        显色

◎HRP 催化底物的一步呈色反应，同样需要一定的时间和温度，

◎ 一定要按照说明书规定的时间温度（一般为37°C，10-15 分钟）恒定反应后终止

◎或根据临界值质控血清吸光度值达0.2 左右使的时间而恒定反应时间.

l        酶标仪判读结果

◎显色反应终止后应立刻比色（30 分钟内）。

常见的显色系统有OPD 和TMB 二种，以后者最为常见，而TMB 酸不易终止因此必须尽快比色以免影响结果。OPD 终止后显棕色，测定波长为490nm； TMB 终止后显黄色，测定波长为450nm， 二种底物的校正波长均用6 30nm。使用双波长的优点可以消除反应板条上的划痕手印的干扰。同时要注意反应板应用纸吸干后才能置酶标仪中比色，否则吸光度易出现负值或损坏滤光片。

l        报告方式

◎定性试验国内外为便于统一计算，一律按S/C.O 方式报告，S 为标本A 值，C.O 即Cut Off 值（阳性判定值)

◎夹心法和间接法以S/C.O≥1 为阳性；

竟争法与中和法以S/C.O﹤1 为阳性

◎Cut Off 的计算公式以试剂盒说明书的为准常见的有：

◎A） C.O=2.1×N（当N 不足0.05 时按0.05 计），

◎此公式由P/N>2.1 换算而来，常用于夹心法。

◎B） C.O=0.5×N，从抑止率公式换算而来，

◎常用于竟争，中和法

◎C） C.O=N+C（C 为常数），用于间接法。

◎D) C.O=C×P+N（C 为常数），用于间接法。此公式最客观，但对生产厂家要求很高，阴阳性对照测定值要基本恒定。

l        报告方式

定量分析用已知量的标准品作一系列稀释，ELISA 测定，绘制标准曲线，结果以绝对量或单位表示。

ELISA 的标准曲线每次都要和待测标本做在同一块板上。

现有的ELISA 定量试剂盒标准曲线只有在较窄的浓度范围内成直线，要得到精确的结果实属不易。因此严禁用定性试剂盒做定量分析。

l        灰区概念

把定量分析的正常值范围引入定性分析建立灰区概念，即将CO 值上下的一段区域定为阳性可疑，需重复实验或换试剂重测以确定其阴阳性，如仍落在灰区范围内则报告+（阳性）。

灰区概念对血站系统的献血员筛查尤为重要。

灰区的设置有二种：

1）C.O×（1±CV），

CV 为该试剂的批内CV& nbsp; (一般在15-20%间）；

2）C.O±2s，s 为实验室做室内质控ROC 的s 。

l        高值钩镰效应（HD-HOOK）

◎在二位点夹心ELISA 中，其剂量反应曲线的高剂量（HIGH DOSE，HD）区段，线性走向不是呈平台状无限后延，而是向下弯曲状，似一只钩子或一把镰刀（HOOK），MILES（197 4）根据此现象写实性地称之为"HD-HOOK" 效应。产生该现象的分子机理有"分子变构说"和"浓度效应"等推论。

◎一步法和二步法均存在，只是前者出现的更早些，大多数是高值低吸光度，很少阴性结果。

ELISA质量控制


ELISA 是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法，由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素，以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测，既可以做定性试验也可以做定量分析等优点，已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。ELISA 的影响因素较多，加强质量管理才能充分发挥其方法学的优点。

l        质量控制血清

　　质控血清是已有靶值的血清，在每次的常规检验中加入一份或数份，通过所得结果来了解本次检验的情况。质控血清检验的结果如能控制其误差在一定范围内，就说明该检验没有发生不允许的误差。如果出现超过允许误差范围的异常结果，提示该检验不合格，应寻找原因，纠正后，重检待测标本。因此质控血清在质控工作中起重要作用。

1 质控血清的使用
　　卫生部临床检验中心制备的乙肝标志物质控血清，可以在-20℃保持半年定值不变。冰冻状态融化使用时，应先混匀，未用完部分可在4℃保存5天。不宜反复冰融或自行分装。开展某项检验的室内质控工作需要的质控血清，一般按3-6个月用量准备。自制的不定值质控血清，在一批质控血清将用完之前，需准备下一批质控血清。质控血清要求性能稳定，较长期内效价不变，其理化性质应与病人样本相近，这样才能有效地起到监测作用。

2 临界值质控血清
　　质控制血清分定值和未定值两种。如只用一份质控血清定值，一般定在正常值与异常值交界点上，定性测定时处于弱阳性水平，称为临界值。乙肝标志物临界值的制定，应按临床要求，为临床提供统一的判断弱阳性的标准。 临界值质控血清可以作为试剂盒中的阳性对照品和阴性对照品以外的第三个对照品，它可以灵敏地反映出试剂盒的检出水平，确保弱阳性反应的标本不漏检。
3 质控血清的制备
    每个实验室可以根据自己的条件，选用临床中心提供的质控血清，或按以下方法自己制备本室使用的质控血清（以乙肝质控血清为例）。
1） 收集新鲜的无溶血、无黄疸、无细菌污染的阳性血清。
2） 56℃加热10小时来活。
3） 离心或过滤除去沉淀。
4） 用10%的小牛血清或正常人血清（PBS缓冲液）将收集的血清稀释至所需的浓度。如能用正常的人血清稀释更好，因其成份更接近于检测标本。
5） 抽滤除菌。按一次使用的量分装小安瓿，封口，20℃保存备用。不可反复冻融。被检物要求检出的水平常被认为是质控血清应选择的水平。如果该试验还有其它要求，则应加所要求浓度的质控物。
6） 标定含量。20-30次测定结果删除>±2SD数据的均值作为靶值，并与已知定值血清对比测定。

l        室内质量控制程序

　　临床检验的检测结果，每次或每天之间不可能没有误差。决定允许的误差范围，以临床上不造成误诊与漏诊为准，通过以下步骤来确定质控范围。
1） 最佳条件下的测定误差。
2） 已知值的血清在常规检验条件下的误差。
3） 未知值的血清在常规检验条件下的误差。
4） 临床应用的要求。对任何一个试验都应确定一个允许的误差范围，前题是满足临床要求。如允许误差定得过小，在临床上不存在任何意义，但为了符合该规定却要花费很大人力、物力和时间。相反，如果将允许误差定得过大，将使监测系统察觉不到临床上要求检出的误差，失去质控的意义。

1 最佳条件下已知值质控血清变异（optimal conditions variance,简称OCV）的测定在本实验室最佳条件下（包括操作者、试剂、仪器等）检测质控血清20-30次，测得结果计算，求出该组数据的均值和标准差（SD）表示该实验室的最佳工作质量。
　　现举例说明HBsAg ELISA法检测时OCV的测定。使用的质控制血清为临界血清，HBsAg浓度为5ng/ml。在该实验室中选择素质最好、操作最熟练的技术员进行认真地专门测定，选用最佳的试剂盒，检测之前，将恒箱、加样器等认真校正、调校正、调试，使用新的加样吸头等，即在最佳、最理想的条件下进行检测。除质控血清外同时测定阴性对照品和阳性对照品。并作双份测定，得出2个吸光值（A值），求出X。连续作20次，求出20个X，即X1……X20。从这20个数据中，求出OCV的X和SD。

2常规条件下已知值质控血清变异（routine conditions variance-known value,简称RCVK）的测定。
　　做常规检验的技术人员，在常规检验的条件下，将质控血清放在常规检测样本中，进行20次检验，结果计算同OCV法。一般认为RCV的SD在OCV的SD两倍范围内可以接受。若太大应该查找原因，使其向OCV的SD值靠近。在改进实验室条件后（例如较正加样器，纠正洗板操作，调正温育温度等），重新进行RCVK的测定。如果RCVK的SD值更小，说明OCV不是最佳条件下测定的，应重新再测OCV。常规条件下，RCVK肯定要比OCV大。通过质控控制各项条件，使RCVK的数据尽可能接近OCV值。RCVK的数据反映该实验室日常工作的质量，用于作质控图，对室内检验的结果进行控制，每日检验的结果，报告能否发出。

3常规条件下,未知值质控血清变异(routine conditions variancl-unknown value 简称RCVU)的测定
　　有时为了避免主观性,再作RCVU测定。测定步骤同RCVK，但检测的操作者不知质控血清的定值，或在操作者不知哪份是质控血汪清的条件下进行常规检验，以排除操作者的主观性。在此不再举例说明。

4质控图
　　通过以上三步骤，可以开始作室内质控图，根据RCVK的和SD作质控框图。利用质控图可以对每次检验的结果进行监测，当没有更换另一批号试剂盒和另一批号质控血清时，该质控图可以连续作下去。 质控血清的S/CO值低于-2SD的范围,属"告警"，应寻找原因并在质控图上记录查出的原因。
　　ELISA试验中，各种检验项目的误差允许范围均有待在实践中得出结论，以上只是举例说明质控方法，不是定论。2SD是一般公认的允许误差限度。每批测定放一份质控血清时，一次超过2SD应作为"告警"，二次超出2SD为"失控"。当质控过程中，出现失控时，出现失控时，应查找原因，通常是试剂盒或质控血清失效造成。更换试剂盒或更换质控血清，找出原因纠正后重新检验。如果检验结果仍达不到要求或找不到原 因时，应重复进行OCV的检验。如果OCV检验的结果仍是好的，说明常规操作出现问题。
一般认为：①一次超出3SD；②连续二次超出2SD；③3-5次连续处于一侧的2SD之内；
　　　　　④5～7次连续偏向横轴的一侧，均为失控。
第③、④种情况，单独依靠记录往往是不易察觉的，但在质控图上可以清晰地发现这种失控。

5统计学计算方法--"即刻性"质控
　　以上介绍的质控方法基本上与临床化学测定的质控方法相同，但ELISA有其特殊性，最合适的质控方法尚待研究建立。有些实验室不是每天进行ELISA项目的检验，而ELSIA试剂盒效期短，用一批号试剂盒连续常规测20次，难度较大。采用"即刻法"质控统计方法，只需连续测3次，即可对第3次检验结果进行质控。"即刻法"的建立具体计算方法如下：
1)先将测定值从小到大排列
2)计算X和SD。
3)计算SDI上限和SDI下限值。
4)将SDI上限、SDI下限值与SDI值中的数字比较。当SDI上限值和SDI下限值＜n2SD时，表示处于控制范围内，可以继续往下测定，继续重复以上各项计算；当SDI上限和SDI下限有 一值处于n2SD和n2SD值之间时，说明该值在2SD~3SD范围，处于"告警"状态；当SDI上限和SDI下限有一值＞n2SD时，说明该值已在3SD范围之外，属"失控"。数值处
　于"告警"和"失控"状态应舍去，重新测定该项质控血清和病人样本。舍去的只是失控的这次数值，其他次测定值仍可继续使用。
　　即刻性质控统计方法，适于ELISA测定的质控。
　　当检测的数值超过20次以后，不必再使用"即刻法"质控统计计算，可以转入常规的质控图的质控。将前20次的数值求出的和SD作质控框架图，第21次的数值，依次点入即可。

l        室间质量评价（external quality assessment,简称EQA）

　　室间质量评价简称室间质评，是由质控中心采用一系列的办法连续地、客观地评价各实验室的试验结果，并发现室内质控不易发现的不准确性，了解各实验室之间结果的差异，并帮助校正，使具有可比性。各实验室试验结果报到质控中心，经过统计分析，得出相互比较的结果。这种评价不能控制各实验室每天发出的检验报告，而是一种回顾性评价。室内质控主要监测试验结果的精密度，而室间质评主要控制试验结果的准确度，不能互相替代。参与质评的实验室应先做好室内质控。

室间质评的方法：
1、 发质控物进行调查
　　这是国内外室间质评的常用形式。部临检中心对乙肝标志物ELISA检验的室间质评采用定期发放质控物至各实验室，各实验室在规定的日期进行检验，并将检验结果报至部临检中心。部临检中心经统计分析，将评价结果寄回各实验室。通过评价，各实验室了解本室工作质量，发现差距，并设法改进，以不断提高检验质量。
　　这种评价方式有一定缺点，即各实验室常对质控物特殊对待，在检验时选用特殊试剂盒，选派特别的技术员进行检验，有的实验室互相和对结果并作修改。这就使EQA的结果不能反映该实验室日常工作水平。
2、 派观察员到实验室进行试剂调查
　　这种调查事先不通知，临时派观察员到实验室，指定采用常规方法，检验规定的一组标本，进行评价。
　　这种调查方式，容易发现该实验室存在的实际问题，可以直接给予指导和帮助，解决问题，提高检验质量。这种调查通常可以使用真实样本，避免采用质控物的一些缺点。

l        评价方法

1）发质控物进行调查，这是目前国内外常见的形式，采用定期发放质控物至各实验室，各实验室在规定的日期进行检验，并将结果报至组织者（部、省临检中心）。组织者通过统计分析，再将评价结果寄回实验室，使其了解工作质量，发现问题，提高质量。其缺点为由于各实验室吃小灶或互相打电话修改结果而达不到真正评价作用。

2）现场调查，事先不通知，临时派出人员到各实验室，规定采用常规方法，检测一组标本，进行评价。这种方法可以解决实际问题，进行现场指导，组织者常因人力、物力的原因而不能经常性进行。

l        成绩计算方法

定性试验：检验结果与预期结果一致，得 100 分，错误不得分，总计实验室的得分。从全部参评单位的得分中求出该批质控物平均分（X）和标准差（s），再通过公式计算出每一个实验室的得分比值（SI）

SI=（实验室得分-平均分X）/平均标准差（s）

SI 在0.0-0.9 间为良好,1.0-1.9 间为优秀,SI 为负值时数值越大成绩越差。

定量试验：SI= （实验室测定值-预期值X）/预期值的标准差s ; SI 越小，表明越靠近靶值，成绩越好。

0-1.0 为优秀,1.1-2.0 为良好,>2.0 为差。SI 无正负之分

l        质量改进（Quality Improvement，QI）

质量改进的建议来源于三方面：

（1）室内质控：提示实验的精密度差，应规范各项操作；

（2）室间质评：提示实验的准确性差，应改进设备的准备或更换试剂；

（3）病人或医生的报怨：提示实验的偶然误差，应分析实验的质控过程是否达标。

l        记录

◎所有实验的原始资料均应存档；所有的记录均应规范登记在册；原始登记表应记录试剂来源、批号；质控血清的来源及测定值并注明是否在控；签上实验者姓名及审核者姓名。

◎如试验结果对临床诊断有决定意义，其样本应保留，至少与病历保存期一致。

ELISA试剂的临床质量评价

ELISA试剂的评价（evaluation）分两个方面：一是试剂本身的质量评价，符合一定要求后才能生产供应；一是在临床应用中效果的评价。以肝炎ELISA诊断试剂为例，首先必须通过中国药品生物制品检定，以得到生产的许可。检定内容除包装、标签、说明书等外，对试剂的性能，如特异性、灵敏度、精密度和线性等均需逐项检定，通过对一系列参比品的检测，结果符合要求者才为合格。ELISA试剂的临床质量评价是用该试剂对临床样本进行检测，以观察其实际应用价值。部临检中心对乙肝ELISA诊断试剂在这方面进行了工作，通过质量评价，促进了试剂质量的提高。

l        诊断试剂临床质量评价要点

　　从临床应用角度考核检验试剂的可靠性，是以其能否区分健康与疾病的能力作为依据的。目前还很难找到100%可靠的试验，任何试验都会出现假阳性或假阴性。判断试验的可靠性常以其灵敏度及特异性作为考核标准。临床应用的灵敏度用疾病患者试验阳性的百分率表示，特异性以无病者试验阴性的百分率表示。进行这种评价，首先需要收集有关的病人血清，然后用公认的检测该项标志物最可靠的试剂进行测定，以确定其为阳性或阴性。
　　这一组表明测定物为阳性或阴性的血清组成"血清盘"（panel）。被评价的试剂测定此血清所得结果与血清盘标明的结果的关系如下表：


表中a为真阳性，b为假阳性，c为假阴性，d为真阴性。
被评价试剂的各项性能指标按以下分式计算：
灵敏度(%)=a/(a+c)×100%
特异性(%)=b/(b+d)×100%
符合率(%)=(a+d)/(a+b+c+d) ×100%
一般认为灵敏度或特异性>90%为良好。符合率是综合灵敏度和特异性的指标。

l        临床考核血清盘的制备要求

1、 采用人的原血清；
2、 血清盘应具有相应的稳定性；
3、 血清盘中样本不含防腐剂，或只含极微量的、不影响检验结果的防腐剂；
4、 血清盘所包含的阴性样本和阳性样本约各占一半；
5、 阳性样本中，应有一定数量的强阳性和弱阳性样本；
6、 血清盘中应有一定数量的临界值上、下含量的样品，以检验试剂的灵敏度。
7、 血清盘中应包含与该项检验相关的病种样本和已积知具有干扰物质（RF因子）的样本，以检验试剂的特异性。

l        临床考核血清盘的建议

　　以抗-HBc-IgM为例，部临检中心收集近百例临床肝炎病人的样本，经美国abbott公司抗-HBc-IgM试剂反复检验筛选。选出血清70份，其中阳性29份，阴性41份，组成抗-HBc-IgM临床考核血清盘。在70份样本中，除7份为无病历的质控血清外，抗-HBc-IgM阳性的22份样本中含临床诊断急性肝炎16例、慢性活动性肝炎5例、重症肝炎1例；抗-HBc-IgM阴性的40份样本中，含临床诊断慢性迁延性肝炎24例、急性肝炎例（均为恢复期采的血样）、慢性活动性肝炎8例（其中5例为恢复血样）。
　　因此，这套抗血清盘用于商品试剂的临床考核，可以将临床上乙肝急性期、慢性活动期病人区分开，具有临床诊断意义。