主题：【分享】液相色谱日常维护及故障排除(二)

三）谱图问题
    液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。
A）峰拖尾
原 因 解决方法
1、筛板阻塞 反冲色谱柱、更换进口筛板、更换色谱柱
2、色谱柱塌陷 填充填料至色谱柱中
3、干扰峰 改变流动相或更换色谱柱
4、流动相PH选择错误 调整PH值，一般在3-7
5、样品与填料表面的溶化点发生反应 加入离子对或碱性修饰剂、更改色谱柱
6、柱外效应 调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）使用小体积的流通池
7、二级保留效应，反相模式 加入三乙胺（碱性样品）、加入乙酸（或酸性样品）、加入盐缓冲剂（离子化样品）换柱
8、缓冲液不合适 使用浓度20-100mM的缓冲液、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液
B）峰前延
原 因 解决方法
1、柱温低 升高柱温，一般为25-40度，不得超过60度
2、样品溶剂选择不恰当 使用流动相作为样品溶剂
3、样品过载 降低样品含量
4、色谱柱损坏 更换新柱
C）峰分叉
原 因 解决方法
1、分析柱污染 可能是柱子污染，再生；入口可能被阻塞，拆下来清洗必要时更换色谱柱。
2、样品溶剂不溶于流动相 采取流动相作为样品溶剂。
D）峰变形
原 因 解决方法
1、样品过载 减少样品载量
2、样品溶剂选择不恰当 减少进样体积、运用低极性样品溶剂
E）额外的峰
原 因 解决方法
1、样品中有其他组份 正常
2、前一次进样的洗脱峰 增加运行时间或梯度斜率、提高流速
3、空位或鬼峰 检查流动相是否纯净、使用流动相作为样品溶剂、减少进样体积
F）保留时间波动
原 因 解决方法
1、温控不当 调好柱温
2、流动相组分变化 防止变化（蒸发、反应等）
3、色谱柱没有平衡 在运行前给予足够的时间平衡色谱柱
4、流速变化 重新设定流速
5、泵中有气泡 从泵中除去气泡
3、流动相选择不恰当 更换合适的流动相、选择合适的混合流动相

G）基线漂移
原 因 解决方法
1、柱温波动。 控制好柱子和流动相的温度
2、流动相不均匀或纯度不高 使用HPLC级的溶剂、高纯度的盐及添加剂、重蒸水、流动相在使用前进行脱气
3、流通池被污染或有气体 用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池
4、检测器出口阻塞 取出阻塞物或更换管子
5、流动相配比不当或流速变化 更改配比或流速
6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时 更改流动相时，平衡半小时
7、流动相污染、变质 检查流动相的组成、重新配制
8、样品中有强保留的物质以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。 重新用水及甲醇清洗柱，除去强留份。
10、检测器没有设定在最大吸收波长处。 将波长调整至最大吸收波长处
H）基线噪音
原 因 解决方法
1、在流动相、检测器或泵中有空气 流动相脱气。强极性溶剂冲洗系统除去气。
2、漏液 检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。
3、流动相混合不完全 用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂
4、温度影响（柱温过高） 减少差异、稳定时间长一点
5、在同一条线上有其他电子设备 检查干扰是否来自于外部，加以更正。
6、泵振动 在系统中加入脉冲阻尼器
7、流动相污染、变质或由低质溶剂配成 检查流动相的组成。
8、流动相各溶剂不相溶 选择互溶的流动相
9、检测器/记录仪电子元件的问题 断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。
10、流通池污染 清洗流通池
11、检测器灯能量不足 更换灯
12、色谱柱填料流失或阻塞 更换色谱柱
13、流动相混合不均匀或混合器工作不正常 维修或更换混合器
I）宽峰
原 因 解决方法
1、流动相组成变化 重新制备新的流动相
2、流动相流速太低 调节流速
3、漏液（特别是在柱子和检测器之间） 检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。
4、检测器设定不正确 调整设定
5、柱外效应影响：柱子过载；检测器对反应时间或池体积响应过大；柱与检测器间管路太长或管路内径太大 小体积进样、减少响应时间或使用更小的流通池、使用内径为0.007-0.01的短管路、减少响应时间
6、缓冲液浓度太低 增加浓度
7、色谱柱污染或失效，塔板数较低 更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。
8、柱入口塌陷 打开柱入口，填补塌陷或更换柱子
9、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰 选择其它类型的色谱柱以改善分离效果
10、柱温过低 提高柱温。温度不宜超过60℃
12、检测器时间常数太大 使用较小的时间常数
J）所有的峰面积都太小
原 因 解决方法
1、检测器衰减设定过高或过低 减少或增加衰减的设定
2、检测器时间常数设定太大 设定较小的时间常数
3、进样量太少或太多 增大或减少进样量
4、记录仪连接不当 使用正确的连接

四）进样阀的问题

以下问题在使用进样阀过程中有可能发生。
A）手动进样阀，转动不灵
原 因 解决方法
1、转子密封损坏 更换或调整转子密封
2、转子太紧 调整转子的松紧度
B）手动进样阀，载样困难
原 因 解决方法
1、进样阀安装不当 重新安装
2、定量环阻塞 清洗或更换定量环
3、进样器污染 清洗或更换进样器
4、管路阻塞 清洗或更换管路