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紫外可见分光光度计（UV）

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主题：【第一届网络原创作品】微量比色皿的正确使用方法

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夕阳

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发表于：2009/01/16 16:11:49 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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（一）为何要使用微量比色皿
（1）测试样量稀少：出于种种原因，当被检测的样品量一般少于1mL时，如果仍然按照传统的检测方法（即将样品放入到标准比色皿中检测时），由于入射光束不能照射到或不能完全照射到样品上，所以不能得到正确的检测结果。其原因是：我们经常使用的标准比色皿，规格为10×10mm，容积为4mL；而入射光束的光斑一般均照射在比色皿的中部（见图－1），换句话说、如果样品少于1.5mL时，从单色器发出的光束光斑是照射不到样品上去的，何况区区的几百微升的样品呢？因此当样品量少时只能采用微量比色皿。

图－1光斑与样品的关系

（2）测试样价格昂贵：有的标准试剂或标样的价格很贵，如果配制的测试样品量过大会造成不必要的经济损失；例如当前比较热门的DNA测试，其标准样品每克的价钱大约1万元人民币。所以使用微量比色皿是势在必行之举。

（二）微量比色皿的种类
（1）短光程微量比色皿：此种比色皿的特点是比色池前后壁之间的距离很窄，所以注入的液体量相应变小了，改变两壁间的距离就可相应改变样品体积，已达到节省样品或试剂的效果；此种比色皿的容积一般在100微升左右（外观见图－2）；此种比色皿目前市面上比较少见了，它的外形设计据说是参照东欧国家的样例。此种比色皿的优点是：由于池面受光面积很大，无需进行光斑与池子间的拟合调整，安放到比色池架时很随意，不用顾忌每次插拔比色池的位置的同一性；缺陷是清洗内壁较为困难。

图－2、短光程微量池

（2）通用型微量池：这种微量比色皿的外形尺寸与普通标准池无二异，并且光程L仍保持10mm不变，只是在池子与光轴平行的两侧内壁上粘贴了两块内衬石英（或光学）玻璃已达到减少池子容积的目的；这样、改变两块玻璃的厚度便可改变池子的容积，此种池子的装入样品量大约在0.35～1mL间；其示意图如图－3

图－3
值得一提的是，通用型微量池分为两种类型，主要区别在贴在池子两壁上的内衬玻璃的材料；一种是普通石英（或光学玻璃），其价格较为便宜；另一种是黑石英材料，价格较为昂贵；使用黑石英材料做内衬的池子的优点是：杂散光较少。
这种通用型微量池的外形见图－4所示；

图－4、通用微量池

使用此种微量池的关键点是：使用前一定要检查入射光斑是否正确地照射到光槽上，如果光斑打偏在内衬玻璃上的话，将会产生很大的噪声；此外由于仪器在制造时，很难保证光轴与比色池架的垂直中心完全吻合，因此光斑难免会偏离微量池的光槽；为了保证光斑完全照射到光槽中，有的仪器在使用通用微量池时往往在池子的前面加装一片遮光板，该遮光板的中央开一条缝隙，该缝隙与微量池的光槽的宽度一致，这样就保证了光斑完全照射到光槽中了，遮光板外形见图－5；

图－5、遮光板

这种通用型微量池的优点是：普及性很强，基本可以配置在任何分光光度计上；同时、国产池子的价格也不算贵，普遍受到使用者的欢迎。但是该池子与短距离微量池一样有个相同的缺点，那就是清洗时比较麻烦，使用一般的冲洗措施不易彻底洗净池内壁的残留物，必须采用超声波清洗器。

（3）专用超微量比色皿：此种比色皿的容积均很小，一般进样量小于50微升，非常适合生物样品及微量萃取样品；这种池子的盛液槽很小且呈水平状，改变容积的方法也是改变池子的光程L，即前后壁的距离，外形见图－6，

图－6、超微量池组

此种比色皿的优点除了进样量少之外，还有进样便捷和进样量易于控制（使用普通加样枪即可）、清洗方便等特点；唯一美中不足的是，由于使用该类型比色皿时要配备专用的池架（见图－7）；所以其价格较为昂贵；

图－7、微量池架

备注：该池子在使用前，要做微量池、遮光板与光束的拟合，通过透过率或光强度的改变来监控池架的正确位置，这个工作由图中的调整螺钉来完成。

（三）使用微量比色皿的注意事项
（1）无论何种微量池，在使用前一定要检查比色池与光斑的拟合状态；这点往往是使用者易于忽略的地方，结果造成测量值的重现性和噪声水平变差。
（2）由于微量池内腔体的狭窄，故给清洗工作带来较使用普通池更大的麻烦，这点需要使用者给予充足的重视。

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2009/1/16 17:08:34 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

哇塞，真是辛苦anping老师了。

又长了点见识。

anping老师，给点建议，能不能把文章里的关键语句用不同的颜色标识出来

这样看注意力比较集中。

另，anping老师，你图片是用什么编辑的啊，当然做的也很好。

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