主题：【求助】新手求助，关于HPLC的诸多问题，非常感谢

原文由 ian_kane 发表:
各位师兄好，本人刚刚读研，虽然看了一些资料但是对HPLC还是不是很了解，但是马上要开始做高效方面的实验了，所以有几个问题想问问大家，问题可能比较幼稚也很基础，但是确实不知道，让大家见笑了：
1.检测已知物比如LTB4和5-HETE，我该如何确定流动相喃？？我需要通过那些手段或者查找什么资料来确定？
2.等于一个已经成型的色谱条件，如果我想进一步的优化或者调整它，我该怎么去选择需要加入或者改变其中某个流动相喃？我该怎么思考和寻找？
3.定量限和检测限是怎么做的？？
4.改如何选择内标物？

非常感谢大家！

原文由 juju11 发表:

原文由 ian_kane 发表:
各位师兄好，本人刚刚读研，虽然看了一些资料但是对HPLC还是不是很了解，但是马上要开始做高效方面的实验了，所以有几个问题想问问大家，问题可能比较幼稚也很基础，但是确实不知道，让大家见笑了：
1.检测已知物比如LTB4和5-HETE，我该如何确定流动相喃？？我需要通过那些手段或者查找什么资料来确定？
2.等于一个已经成型的色谱条件，如果我想进一步的优化或者调整它，我该怎么去选择需要加入或者改变其中某个流动相喃？我该怎么思考和寻找？
3.定量限和检测限是怎么做的？？
4.改如何选择内标物？

非常感谢大家！

1  可以查阅相关文献，如含量测定等的文献，或者看看药典等，色谱条件如流动相、色谱柱、检测器等是什么，然后根据自己手头现有的条件，来摸索流动相的具体比例和组成。
2 具体怎么做就是要保证你测定的样品没有干扰、重现性、峰形等良好，能够满足你的检测要求，在这样的前提下，样品保留时间尽量短些，这样有利于大批量进样。如果是反相柱，一般有机相比例越高，样品保留时间越短，但是不利于样品间的分离，如果两个峰靠的近，就需要降低有机相的比例，有时候也可以调节流动相的pH值、或是换色谱柱等。
3 定量限就是满足信噪比为10时的样品浓度，检测限就是信噪比为3时的样品浓度。信噪比一般的工作站中可以计算得出。
4 内标最好选择与样品结构性质相近的物质，一般选用样品的同系物，但是内标不能干扰样品的出峰，且要稳定。如果没有，有时也可以选择其他的在你的色谱条件下能出峰，且满足前面的条件的物质。在样品前处理时，内标也要有稳定的回收率才行。