消毒与灭菌常用方法及设备(引自网络)

（一）干热灭菌
【原理】
高温对细菌有明显的致死作用，主要机理是凝固菌体蛋白质，也可能与细菌DNA单螺旋断裂、细菌膜功能受损及菌体内电解质浓缩有关。干烤箱为常用的干热灭菌器，其杀菌作用是通过脱水干燥和大分子变性完成的。
【构造】
干烤箱是中间夹着石棉的双层金属制成的方形或长方形箱，箱底装有热源，箱内有数层金属架，并附有温度计和自动温度调节器等装置。把待灭菌的物件均匀地放入恒温干燥箱，加热至160℃～170℃维持2小时即可达灭菌目的。
【使用方法及注意事项】
1.将包扎好的待灭物品（培养皿、吸管器等）放于箱内，注意不要摆得太挤，以免妨碍气流流通。
2.关门，插上电源插头（常为220伏），拨动开关，旋动恒温调节器，至红灯亮。
3.待温度上升160℃～170℃时，借恒温调节器的自动控制，保持此温度2小时。
4.灭菌后停止加热，待温度下降至40℃以下方可开门取物，在这之前切勿自行打开箱门，否则其内物品(如玻璃器皿等)会因温度骤然下降而爆裂。
【应用】
干热灭菌主要用于要求干燥的、耐高温的物品灭菌，如玻璃器材、瓷器、凡士林、液体石蜡、药粉等的灭菌。一般不耐高温的、含有水份的物质，不能用这种方法灭菌。

（二）湿热灭菌
【原理】
高温对细菌有明显的致死作用，主要机理是凝固菌体蛋白质，也可能与细菌DNA单螺旋断裂、细菌膜功能受损及菌体内电解质浓缩有关。湿热灭菌所需温度较低，时间较短(表3-2)。特别是高压蒸气灭菌，因增加压力而提高温度，灭菌效果最佳。其主要优点是：①温度较高，灭菌所需时间较短；②蒸气穿透力强；③蒸气冷凝时释放汽化热，能迅速提高物品的温度；④物品不过分潮湿。
表3-2 热力消毒灭菌法比较
方法温度(℃) 时间(min) 灭菌器适用物品
焚烧＞500 瞬时废弃物品、动物尸体灭菌
干烤 160～170 120 干热灭菌器（干烤箱）玻璃器材、瓷器等灭菌
巴氏消毒法 61.1～62.8
71.7 30
15-30s 牛奶、酒类等消毒
煮沸消毒法 100 5 食具、刀剪、注射器等消毒
流通蒸气消毒法 100 15～30 Arnold流通蒸气灭菌器食具等消毒
间歇灭菌法 100 30 流通蒸气灭菌器(重复3次) 不耐高温的含糖、牛奶等培养基
高压蒸气灭菌法 121 15～30 高压蒸气灭菌器耐高温、高压及不怕潮湿的物品
高压蒸气灭菌器是目前应用最广泛、灭菌效果最好的灭菌器具，其种类有手提式、直立式、横卧式等。它们的构造及灭菌原理基本相同。高压蒸气灭菌方法的原理是水在大气中100℃左右沸腾，水蒸气压力增加，沸腾时温度将随之增加，因此，在密闭的高压蒸气灭菌器内，当压力表指示蒸气压力增加到15磅(1.05kg/cm)时，温度则相当于121.3℃，在这种温度下20min即可完全杀死细菌的繁殖体及芽胞。
【构造】
高压蒸汽灭菌器有各种形式及规格。下面以常用的高压蒸汽灭菌锅为例进行介绍。高压蒸汽灭菌锅是一个密闭的耐高温和耐高压的双层金属圆筒，两层之间盛水。
①外锅：供装水产生蒸汽之用。坚厚，其上方或前方有金属厚盖，盖有螺栓，借以紧闭盖门，使蒸汽不能外溢。加热后，灭菌器内蒸汽压力升高，温度也随之升高，压力越大，温度越高。
外锅壁上还装有排气阀、温度计、压力表及安全阀。排气阀用于排出空气；压力表：以表示锅内压力及温度（公制压力单位为公斤/cm2、英制压力单位磅/英寸2、温度单位℃）；安全阀又称保险阀，利用可调弹簧控制活塞，超过定额压力即自行放汽减压，以保证在灭菌工作中的安全。
②内锅：为放置灭菌物的空间。

【使用方法及注意事项】
1.使用前的准备：灭菌器内清洗干净，检查进气阀及排气阀是否灵活有效，并加入适量水。
2.装放灭菌物：将待灭菌的物品放入灭菌器内，注意不要放得太挤，以免影响蒸汽的流通和灭菌效果。然后加盖旋紧螺旋，密封。
3.预热及排气：加热升温使水沸腾，并由小至大打开排气管（排气阀），排除冷空气，继续加热升温，再关闭排气管（阀）。
4.升压保温：让温度随蒸汽压力增高而上升待压力逐渐上升，待蒸汽压力升至所需压力(一般为103.43kPa，温度则相当于121.3℃)时，控制热源，维持所需时间，持续15～20min即可达到灭菌目的。
5.降压开盖取物：保压到规定时间之后，就停止加热，缓缓排气，待其压力下降至零时，方可开盖取物。
6.注意事项
⑴此法灭菌是否彻底的一个关键是压力上升之前，必须先把蒸汽锅内的冷空气完全驱尽，否则，即使压力表已指到103.43kPa，而锅内温度则只有100℃，这样芽孢则不能被杀死，造成灭菌不彻底，所以必须进行排气。
⑵降压一般通过自行冷却。如果时间来不及，可以稍开排气阀降压，但排气阀不能开得太大，排气不能过急，否则灭菌器内骤然降压，灭菌物内的液体会突然沸腾，将棉塞冲湿，甚至外流。另外，降压时压力表上读数虽已降至“0”时，灭菌物内温度有时还会在100℃以上，如果开锅太快还有沸腾的可能，所以最好在降压后再稍停一会，灭菌物温度下降后再出锅较妥当。灭菌物灭菌后仍处于高温时，容器内呈真空状，降温过程中外部空气要重新进入容器。一般叫“回气”，降温过快，回气就急，如棉塞不严密，空气中杂菌就会重新进入灭菌物使其污染，这往往造成高压蒸汽灭菌的失败。因而降压开盖取物不宜过急。
【应用】
高压蒸汽灭菌可用于耐高温、高压及不怕潮湿的物品，如普通培养基、生理盐水、纱布、敷料、手术器械、玻璃器材、隔离衣等的灭菌。

补充答案：

雾非雾回复于2009/04/22

高压湿热灭菌是利用高温和高压的湿热蒸汽形成很强的穿透力，有效杀菌。
高压湿热灭菌最要注意的就是在升温阶段要完全排净灭菌器内的冷空气，让蒸汽充满，防止形成假压，使灭菌操作失败。
在使用过程不能完全关闭排汽阀，要让蒸汽保持流动，保证良好的杀菌效果。
在使用过程要有专人监护，安全阀要安全有效。要注意排汽口排汽的方向，防止高温蒸汽烫伤。
灭菌停止要等内部压力完全降下来之后，再打开，防止高温蒸汽烫伤。

太白金星回复于2009/04/23

使用前要检查电源是否正常并向水箱内注水至额定水位线。通常水位应在高低水位线中间偏上位置，可避免中途补水。消毒物品放入锅内后要关门锁紧。
根据消毒物品对压力温度的需要，选择合适压力挡。
当消毒锅内压力、温度达到整定值时开始计时，消毒时间到达后切断电源，打开排水阀，将消毒锅内剩余的水汽排出，压力表指示为零后。方可开启消毒锅锅门，取出消毒物品。
低水位报警灯亮时。应检查水位，确认水位低于下限时应向水箱补水。补水结束。按低水位复位按钮即可重新恢复工作，但需要重新计算消毒时间。因此消毒开始前检查水位很重要。要保证消毒前水位在高、低水位线中间偏上位置且管道无渗漏。
消毒锅用压力表、安全阀应每半年由质检部门校检一次，发现问题及时排除。密封圈老化造成漏气时应及时更换以保证消毒效果。

楚无伤回复于2009/04/23

原理说来简单
就是人为制造一个细菌生存困难的环境
经过一段时间之后让细菌自己死翘翘
至于什么细胞、DNA的专业术语更加清楚
不过也比较的不大众化

注意事项比较多
第一就是安全问题——不要问为什么，俺向来主张安全第一的
第二就是注意压力，不要出现假压或者超压的现象
第三就是注意灭菌的时间

liu999999回复于2009/04/23

应该注意定期送检压力表，确保压力表指示正常。
仪器使用完毕，应将其中的水全部倒出，以防生铁锈。