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液相色谱（LC）

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主题：【讨论】HPLC 方法摸索

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hupilan007

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2009/4/30 16:02:13 11楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我们公司恰好做的都是新药，结构性质什么根本没有，保密呢。所以只能自己摸索。

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hupilan007

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2009/4/30 16:04:19 12楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我说的就是的方法啊，因为我们来的化合物都是未知的.

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slake99

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2009/5/1 8:24:25 13楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

HPLC应用范围实太是太广，从你的话中可看出你仅入门而已，还要深造，有待时日

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hjphjp

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2009/5/6 22:36:12 14楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

太深奥了。

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fengxuemei

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2009/5/7 10:29:08 15楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 wenshaowei-2008 发表:
在开发HPLC分析方法之前，首先要对被测物的一些性质进行了解
液相方法无非就几点：1.检测器，可以利用物质的结构，确定选择什么样的检测器，如选择紫外，就可以用紫外分光光度计扫描最大波长
2.柱子的选择，一般首选C18柱，特殊物质可以选用专用的柱子，如手性柱
3.流动相，正如LZ所说，一般物质都可以用水和乙腈或者甲醇就可以了，但是有的时候分离效果不佳，可以选择用缓冲盐，调PH值，真假柱温等
4.物质的浓度，可以根据仪器的灵敏度，选择合适的浓度

正如版主所说的步骤进行逐步筛选，对于未知的新物质（尤其是研发的新产品），更是需要耐心摸索，不断尝试。
LZ的困惑可能能理解点，摸索是蛮难的，经验多了可能就好些。初期要多查阅资料，有条件的话，最好配备点标准品。很多我们觉得的“未知物质”可能在Sigma这样的试剂公司能找的标品的。

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fengxuemei

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2009/5/7 10:39:05 16楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

调整HPLC分析方法开发中流动相的方法：
1、由强到弱：一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或缓冲溶液)进行试验，这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
2、三倍规则：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。这是一个聪明而又省力的办法。调整的过程中，注意观察各个峰的分离情况。
3、粗调转微调：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
先100%的有机溶剂，再降下来。因为有些分离96%即可分离

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