我是用UV-2550中的动力学模块测酶活。（锰过氧化物酶MnP酶活测定方法：先将0.2113g MnSO4 溶解于1 L 酒石酸缓冲液( 50mmol·L - 1 ,pH = 4.5) 中,再取2.4 mL 的该溶液和0.6mL 粗酶液混匀,即得3 mL 反应液. 在30 ℃下,往此反应液中加80μL H2O2 溶液(20 mmol·L - 1 ) 启动酶促反应,并在290 nm 波长下测定反应2 min 前后的反应液吸光度变化. 一个酶活力单位(U) 定义为每分钟氧化Mn2 + 产生1μmol Mn3 + 所需的酶量.）发现有些酶液的颜色较深（非纯酶液，而是用锰过氧化物酶降解木质素后的发酵液，棕黄色，黄褐色那样），从而无法实现自动调零，作出来的曲线也是波动特别大，锯齿状，没法读数。请问各位有没有好的解决方法？仪器操作上的或者是酶液的预处理方面的都可以
谢谢了

推荐答案：tutm回复于2009/05/16

你是使用290nm单色光测试样品，因此色度（可见光区域的吸收）不会有影响。

请你将参比先换成空白溶液，看反应液的起始吸光度是多少，如果大于1，请稀释至1以下。

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2009/5/15 15:22:32 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

估计你的试样溶液时浑浊的，建议你将待测试样溶液过滤一下再测

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2009/5/15 15:22:44 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

还有，你现在的吸光度可能也太高，需要稀释再测

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2009/5/15 15:23:15 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

估计你的试样溶液是浑浊的，建议你将待测试样溶液过滤一下再测

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2009/5/15 16:14:54 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 tutm 发表:
估计你的试样溶液时浑浊的，建议你将待测试样溶液过滤一下再测

我是用微孔滤膜（0.45微米）过滤的，结果就是上面的那样。每次我都稀释（酶液量减为原来的二分之一），结果吸光度也不是很大，不到0.05，不敢稀释了。估计是色度太大了，影响测试，但具体怎么消除这个影响不怎么清楚。

我是第一次用UV-2550，别人告诉我的操作方法（动力学）是：“连接后，设置时间3min，波长为290nm，然后设置基线为300nm到280nm，再到波长290nm，然后放入两个比色皿（都含反应液，完全一样），自动调零，再向非参照样中加入H2O2启动反应，再点击开始。”请问这样操作有问题吗？

http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20081113/1584244/我在这个帖子里看到“1 先输入波长范围，点击基线校正（baseline）
2选择到波长500纳米，点击自动调零。
原因：一般分光光度计的能量在500纳米左右最强，在此自动调零可以得到最正确的基线。”，与我的操作矛盾吗？

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2009/5/16 11:35:44 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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2009/5/16 14:54:02 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 tutm 发表:
你是使用290nm单色光测试样品，因此色度（可见光区域的吸收）不会有影响。

请你将参比先换成空白溶液，看反应液的起始吸光度是多少，如果大于1，请稀释至1以下。

谢谢，我会再试试的

我是第一次用UV-2550，别人告诉我的操作方法（动力学）是：“连接后，设置时间3min，波长为290nm，然后设置基线为300nm到280nm，再到波长290nm，然后放入两个比色皿（都含反应液，完全一样），自动调零，再向非参照样中加入H2O2启动反应，再点击开始。”请问这样操作有问题吗？

http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20081113/1584244/我在这个帖子里看到
“1 先输入波长范围，点击基线校正（baseline）
2选择到波长500纳米，点击自动调零。
原因：一般分光光度计的能量在500纳米左右最强，在此自动调零可以得到最正确的基线。”，与我的操作中到波长290nm矛盾吗？

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