续前:
上述三个实例是非常成功的,给人的启示是深刻的。“SAR by NMR”方法的优点在于: (1)使用2D 15N/1H HSQC谱来检测结合于15N标记蛋白(酶)的小分子配体,由于15N谱的编辑功能观测不到来自配体的信号,因此即使在高浓度时也能检测到这种结合;(2)使用HSQC谱可以迅速检测到不同配体的不同结合部位,这对于阐明结构-活性关系以及指导配体连接化合物的合成是至关重要的。如果不能获得足够量的15N标记蛋白,则HSQC谱方法不再适用。新近作者又开发了两种不需要15N标记蛋白的新方法——一维驰豫编辑和扩散编辑NMR方法[20],弥补了这种方法的不足。(3)“SAR by NMR”方法的优点还在于如从1000个化合物的库中筛选两个结合部位的先导配体相当于传统方法筛选1000×1000=1,000,000个化合物,这种方法相当快(如上述实例二的成功仅用6个月时间),而传统方法要长得多。(4)两个配体可通过不同的连结子(linker)连接起来,这种连接还从焓变和熵变对结合能的贡献上得到了理论支持[21]。
“SAR by NMR”方法在概念上类似于组合化学,然而这两种方法有本质的区别,在组合化学中发现配体需要制备测试大量的化合物,不幸的是,合成方案的选择和生物测定往往既困难又费时,进而相对统一的条件需要限制了有用的分子构建模块及化合物的多样性。在“SAR by NMR”方法中,配体已预选进行了优化,所以只需合成少数几个化合物即可。另一方面“SAR by NMR”方法不同于组合化学,筛选小分子化合物的范围仅仅受到水溶解度达mM浓度的限制,结果可以收集到多种多样的化合物样品。“SAR by NMR”这种方法也受到一定的限制:(1)需要高场NMR谱仪(500MHz以上);(2)大量的15N标记蛋白(200mg以上);(3)靶标蛋白(酶)的分子量小于40KD;(4)靶标蛋白(酶)在水中的溶解度达0.2mmol.L-1浓度;(5)用于检测的小分子在水中的溶解度达mmol.L-1浓度。
总之,本文从两个方面介绍了核磁共振技术在构效关系研究中的应用。第一种13C NMR方法类同于传统的QSAR研究,对于新药分子设计是有益的,第二种方法是全新意义上的创新方法,相信随着人们对农药,医药的作用机制及靶标蛋白(酶)的三维结构的深入了解和相关功能的研究,利用这种方法会加速新农药、新医药的创制过程,这无疑对于即将进入21世纪的我国新药创制体系的形成和发展产生深远的影响。
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