主题：【讨论】液质色谱柱讨论,欢迎参加

我先来说下液相色谱的发展历史吧~

从1903年,Tswett发表了吸附色谱分离植物色素的论文中我们得知:Tswett在波兰华沙大

学研究植物叶子成分时，把碳酸钙粉末装在一个细长的玻璃管中，把从叶子中用石油醚

萃取的物质倒在管中的碳酸钙粉末上面，然后用石油醚洗脱被吸附的色素，在管中形成

了不同的颜色色带，Tswett当时叫这种色带为色谱，并发表论文到德国植物学杂志上.这

应该是最早的液相色谱了~

但是其后很长一段时间内都是液相色谱还停留在经典的液相色谱水平,倒是气相色谱,薄

层跟纸色谱发展比较迅速.到1960S后期,人们已经发展得比较成熟的气相色谱的理论与技

术应用到液相色谱上来，使液相色谱填料制备技术得到了迅速的发展,并使液相色谱分析

实现了高效化和高速化。具有优良性能的液相色谱仪于1969年商品化。从此，这种分离

效率高、分析速度快的液相色谱就被称为高效液相色谱法（high performance liquid

chromatography，HPLC），也称高压液相色谱法或高速液相色谱法。

从原理来看，高效液相色谱同经典液相色谱比较，没有很大的区别，主要体现在高灵敏

度检测，高压泵和高效固定相填料。在保持高效分离效率，高检测灵敏度和高分析速度

前提下，也保持了经典液相色谱的特点：分析样品种类多，流动相多样化和便于制备色

谱等特点。高效液相色谱与经典液相色谱比较如下图：

高效液相色谱法与经典液相（柱）色谱法的比较

项目             高效液相色谱法    经典液相（柱）色谱法
色谱柱柱长/cm             10～25        10～200
色谱柱柱内径/mm               2～10    10～50
固定相粒度：粒径/um       5～50    75～600
固定相粒度：筛孔/目    2500～300    200～30
色谱柱入口压力/Mpa       2～20    0.001～0.1
色谱柱柱效/（理论塔板数/m）2×105～5×104  2～50
进样量/g             10-6～10-2     1～10
分析时间/h               0.05～1.0     1～20

经过30多年的发展，现代高效液相色谱技术得到了不断的完善和改进，色谱柱的分离效

能和应用范围得到了很大的提高。(未完待续)

(接前文...)
关于以下最新的色谱柱技术,了解不是很清楚,以下是引用网友的原文,如果有更详细的资料,希望能与大家分享~~~
UPLC重在高压，分离效能很好；小柱也很好；但特别容易堵，操作时要格外注意，且进样针容易弯曲，一旦弯曲就要重新更换。
RRLC虽说耐高温是卖点，但也可以不用高温也能达到良好的分离，仪器操作与HPLC类似，不需特殊处理。
UFLC是在HJPLC基础上，稍稍做了些改造，压力与HPLC一致，但分离速度比HPLC要快一些，但分离速度远不及UPLC，当然价钱也便宜。


色谱法是分析化学中应用最广泛发展最迅速的研究领域，新技术新方法层出不穷。
1,新固定相的研究
固定相和流动相是色谱法的主角，新固定相的研究不断扩展着色谱法的应用领域，如手

性固定相使色谱法能够分离和测定手性化合物；反相固定相没有死吸附，可以简单地分

离和测定血浆等生物药品。
2,色谱新方法
色谱新方法也是色谱研究热点之一。高效毛细管电泳法是目前研究最多的色谱新方法，

这种方法没有流动相和固定相的区分，而是依靠外加电场的驱动令带电离子在毛细管中

沿电场方向移动，由于离子的带电状况、质量、形态等的差异使不同离子相互分离。高

效毛细管电泳法没有HPLC方法中存在的传质阻抗、涡流扩散等降低柱效的因素，纵向扩

散也因为毛细管壁的双电层的存在而受到抑制，因而能够达到很高的理论塔板数，有极

好的分离效果。

液质色谱柱是在液相色谱柱的基础上发展起来的，

色谱柱的分类主要有正相柱和反相柱，正相柱根据填料的不同有氨基柱、氰基柱等，而反相柱主要有C18、C8、C4，还有一些混合键合相的。

最近忙没时间整理这个专题的资料,等我有空整理好再置顶吧~~~

液相色谱柱的分类:
从填料的不同可以分为以下几种:硅胶基质填料,聚合物填料,其他无机填料

1,硅胶基质填料
a 正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
b 反向色谱 反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
2,聚合物填料
聚合物填料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等,其主要优点是在pH之为1~14均可使用。相对于硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性，大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。相对于硅胶基质填料，聚合物填料的色谱柱柱效较低。
3，其他无机填料
其他无机填料的色谱柱目前也已经走向商品化。由于这类填料的特殊性质，一般多用于特殊用途。例如：石墨化碳作为反相色谱填料，不需要表面改性，保留能力强，可用于分离某些几何异构体，并可在任何温度和pH值下使用。氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的柱床，可在pH＝12的流动相中使用。新型氧化锆基质色谱填料，应用范围pH1－14，温度可达100度，目前仍在研究中。

这些都非常有用呢，感谢notrofang的辛勤劳动，如果能总结的能加精炼一些就更好了啊，呵呵

关于色谱柱的粒度
目前市场上出售的色谱填料一般在1~30um,而分析分离用的填料粒度集中在3~5um。填料粒度主要影响色谱柱的2个参数：柱效和背压。粒度越小，比表面积越大，柱效相对越高，而柱压越大。这就是3um以下填料使用受到限制的原因。相同条件下，3um填料色谱柱的背压是5um的2倍。柱效提高的益处在于可以选择更短的色谱柱，缩短分析时间。同时，可以采用低黏度（如乙腈代替甲醇）的溶剂做流动相并增加色谱柱的使用温度（使用柱温箱），以降低色谱柱的压力。
现在市场上使用小粒度的的色谱柱越来越多了，但是这对液相色谱的整个系统要求也更高了，要求耐高压，或者耐高温。目前waters的uplc以及agilent的rrlc还有最新的uhplc是这些系统的典型代表。当然也是液相的一个发展趋势～～～

几种常用的色谱系统
1，反相色谱，这个目前应用应该是最为广泛的，所谓反相色谱就是指流动相的极性大于固定相的极性。
2，正相色谱，顾名思义，是指流动相的极性小于固定相的极性。
3，离子对色谱，分为正相离子对色谱跟反相离子对色谱。
4，液固色谱，当流动相通过固定相（吸附剂）时，吸附剂表面的活性中心就要吸附流动相分子。
5，体积排阻色谱，一种纯粹按照溶质分子在流动相溶液中的体积大小分离的色谱法。
6，离子交换和离子色谱
7，疏水作用色谱（HIC），它的原理与反相色谱相同，区别在于HIC填料表面疏水性没有反相色谱强。
8，亲和色谱，它时利用生物大分子和固定相表面存在某种特异性吸附而进行选择性分离的一种生物大分子分离方法。

详细的介绍后续～～～

反相色谱（reversed phase chromatography,RPC）是基于溶质，极性流动相和非极性固定相表面间的疏水效应建立的一种色谱模式。任何一种有机分子的结构中都有非极性的疏水部分，这部分越大，一般保留值越高。在高效液相色谱中这是应用最广的一种分离模式。在生物大分子的反相液相色谱条件下，流动相多采用酸性的，低离子强度的水溶液，并加一定比例的能与水互溶的异丙醇，乙腈或甲醇等有机改性剂。大量使用的填料为孔径在30nm以上的硅胶烷基键合相，除此以外，也有少量高聚物微球。实验表明，烷基链长对溶质的反相保留没有显著的影响，但对蛋白质的活性回收上短链烷基（如c4，c8，苯基）和长链烷基（如c18，c22）反相填料是有区别的。表现在烷基链越长，固定相的疏水性越强，因而为使蛋白质较快洗脱下来，需要增加流动相的有机成分。过强的疏水性和过多的有机溶剂会导致蛋白质的不可逆吸附和生物活性的损失。综合起来说，在烷基键合硅胶上的反相色谱，由于其柱效高，分离度好，保留机制清楚，是蛋白质分离，分析，纯化和结构阐明以及许多低分子量成分广泛应用的一种方法。近年来在农业和食品科学领域又有一些新的应用。