主题：【已应助】【求助】请教LC-MS/MS定量中内标的一个问题

原文由 cl_811224 发表:
用lc-ms/ms同时定量分析两个样品，按照结构相似的原则选择了一个内标，先把给药的样品做了，定了一个大概的范围之后今天开始做标曲，内标采用10ug/mL的浓度平行加入10uL到200uL血清中，结果做出一个奇怪的现象，标曲低浓度的点内标的面积狂小，只有几十到一百多，随着标曲浓度上升，内标的面积也慢慢上去了（不是操作引起的损失），高低浓度之间内标的峰面积差了2个数量级，但是除去内标以外加入的标准物质的量线性非常的好，能做到2个9，开始以为是操作误差，后来又做了两条标曲，都是同样的问题，郁闷了，请有经验的高手指导一下，谢谢了

原文由 elevern 发表:
单作内标没有样品的生物样本的平行性如何呢？你选择的内标有没有和样品分开还是在一起的，你做一下基质效应和回收率就知道了，多半是内标选择的有问题或者样品对内标的离子化效率产生了影响。

原文由 cl_811224 发表:

原文由 elevern 发表:
单作内标没有样品的生物样本的平行性如何呢？你选择的内标有没有和样品分开还是在一起的，你做一下基质效应和回收率就知道了，多半是内标选择的有问题或者样品对内标的离子化效率产生了影响。

单独加入内标的样品做过了，没有问题，我也怀疑是样品引起内标峰面积变化，但是为什么是低浓度时影响，高浓度时却正常了呢，想不太明白，请指教

原文由 zhufangwei 发表:

原文由 cl_811224 发表:

原文由 elevern 发表:
单作内标没有样品的生物样本的平行性如何呢？你选择的内标有没有和样品分开还是在一起的，你做一下基质效应和回收率就知道了，多半是内标选择的有问题或者样品对内标的离子化效率产生了影响。

单独加入内标的样品做过了，没有问题，我也怀疑是样品引起内标峰面积变化，但是为什么是低浓度时影响，高浓度时却正常了呢，想不太明白，请指教

不知道你做的是什么试验，本身你的这种做法就是不对的，内标在标准曲线中应该是选择相同的浓度，改浓度的确定是以最大药物的浓度1/2-2/3为原则。单独的说你的内标自己不成线性是有可能的，你的浓度加的太高，会不会有残存效应你自己考察过没有。高浓度正常是因为即使有残存效应对高浓度的影响不明显，可是对于低浓度的影响则比较明显。

原文由 cl_811224 发表:

原文由 zhufangwei 发表:

原文由 cl_811224 发表:

原文由 elevern 发表:
单作内标没有样品的生物样本的平行性如何呢？你选择的内标有没有和样品分开还是在一起的，你做一下基质效应和回收率就知道了，多半是内标选择的有问题或者样品对内标的离子化效率产生了影响。

单独加入内标的样品做过了，没有问题，我也怀疑是样品引起内标峰面积变化，但是为什么是低浓度时影响，高浓度时却正常了呢，想不太明白，请指教

不知道你做的是什么试验，本身你的这种做法就是不对的，内标在标准曲线中应该是选择相同的浓度，改浓度的确定是以最大药物的浓度1/2-2/3为原则。单独的说你的内标自己不成线性是有可能的，你的浓度加的太高，会不会有残存效应你自己考察过没有。高浓度正常是因为即使有残存效应对高浓度的影响不明显，可是对于低浓度的影响则比较明显。

不好意思，你可能没有注意我说的浓度不是内标的高低浓度，应该是标准物质的浓度，内标加的都是一样的，不过在标曲的高低浓度中呈现的峰面积不一致。

原文由 cl_811224 发表:
我都是标准溶液加10uL，内标加10uL，加入到200uL血清中。问题到现在还是没有搞明白，我自己觉得可能是内标选择不合适导致的，因为内标和其中一个待测物分子量接近，我用的是选择反应监测模式，可能造成了干扰，但是最近忙其他事也没有时间仔细研究，以后有机会再看看