1.压力问题
压力来自于液体在系统中流动产生的反压，压力的大小取决于柱子的规格液体的粘度以及流速。柱子本身贡献了绝大部分压力，对于常规的ＬＣ系统（(<6000 psi; <400 bar），系统本身（除柱子外）贡献的压力可以忽略不计，而对于UPLC系统（>6000 psi)），由于管径很细，系统本身除柱子外）大约贡献1000 psi的压力。
压力的问题有可能是过高，过低，或者是不稳定，哪么产生的原因有哪些呢？
1正常的压力是多少
在解决压力问题之前，首先要知道正常的压力时多少，那么计算压力的方法有两种：实际测试法和预估法
首先看一下实际测试法，就是安装新的柱子和保护柱，待系统稳定后，记录压力，那么此时的压力就是一个基点，代表了系统状态最好时的压力，从后端往前，依次断开，记录每一步骤的压力，这样就可以知道各个部件贡献的压力。
另外一种方式预估法：可以通过公式得到一个理论的压力
P ≈ (2500 L η F) / (dp2 dc2）
L: 柱子的长度（mm）
η：液体粘度
F:流速（ml/min）
dp:填料粒径（um）
dc：柱子内径（mm）

2压力过高
压力过高，说明系统中某个模块堵了，可以从后往前拆，排除是是哪个模块堵了，经常堵的地方有针座和柱子本身，针座可以反冲，然后继续使用。如果柱子堵了，可以试着将柱子反接，看能否将污染物冲出，不然就要更换新的柱子
在实际操作中，建议柱子前端安装保护柱来延长柱子的寿命，相比较昂贵的柱子价格，保护柱还是很便宜的。
3压力过低或者不稳定
出现这种情况，有可能是leak或者是泵中有气泡，也有可能是泵的阀芯有问题。
首先排除比较容易的，先去检查是否各个接口处是否有leak，在check的时候，容易忽略的两个地方是泵头处和进样六通阀。
其次是排除气泡的问题，检查流通相是否足够，检查溶剂过滤头是否堵了，其次是 purge 流动相来排除泵中的气泡
如果此时问题还没有解决，就要怀疑是否是泵的阀芯的问题。泵有主动阀阀芯和出口阀阀芯，将阀芯取出用甲醇超声，如果问题依旧存在，就要更换新的阀芯了。
2.保留时间问题
经常遇到的关于保留时间的问题有保留时间拖后，提前或者是不稳定，哪么可能的原因有哪些？
1影响保留时间的因素有哪些？
流动相，柱子，仪器本身，环境以及样品本身都会影响到保留时间的变化，其中样品本身指的是样品基质或者样品性质的变化导致保留时间的变化，在此为了简化问题，假定样品是稳定的，无基质干扰。
流动相的配比或者是pH的变化都会影响到保留时间的变化，排除流动相的问题很简单，只要重新配置一份新的流动相即可
柱子是否寿命的，使用的一段时间后，柱子的固定相性能会发生变化，保留会发生变化，但这种变化是缓慢的，不会突然的发生。
气泡，leak或者是阀芯有问题都会影响到保留时间，那么伴随的还有压力的变化
环境温度的变化也会影响保留时间的变化，之前的文章里提到过温度每变化1度，保留时间会发生2%的变化。
2如何确定可能的因素
如果保留时间拖后，提前或者不稳定，首先检查方法本身是否有变化，流速或者流动相比例设置的变化会导致保留时间的变化
然后观察保留时间变化的同时是否有压力的变化，如果有压力的变化，首先解决压力的问题，如上面的讨论，待压力问题解决后再看保留时间
如果问题此时依旧存在，那么配置就要一份新的流动相。
前面提到过，如果是柱子的问题，保留时间不会突然的发生变化，也许会缓慢的漂移，此时意味着可能要更换新柱子了。
（待续 ~~，明天继续讨论峰形问题和一些常见的预防措施）

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主题：【分享】优秀的液相操作必须知道的四点（一）