⑶炽灼残渣检查法
样品碳化后,加入硫酸,低温出去硫酸,在700-800℃(重金属检查在500-600℃)下完全灰化直至恒温。这里需要注意的是由于温度很高,如果立即放入干燥器中,会导致干燥器内气压下降导致干燥器无法打开,所以最好放入减压干燥器,等气压与外界相同,再打开。
⑷重金属测定
重金属检查指在规定实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。检测的是铅盐。具体的操作参考药典,通过纳氏比色管比色法来确定,砷盐的检测有古蔡氏法、二乙基二硫代氨基甲酸银法。
⑸样品的含量测定
根据样品的性质和测定的成分,选择不同的含量测定方法,对于测定某一类的成分,可以选用紫外分光光度法,对于测定某一个或某几个可以使用
液相色谱方法或
气相色谱方法,根据测定的样品类型不一样,选用不用的细致方法。如对于样品成离子状态且碱性或酸性非常强可以选用
离子色谱法;弱碱性样品可以选用离子对色谱法;弱酸性样品及非离子型样品可以反相色谱法-键合相色谱法,弱酸性的通过加入醋酸、磷酸等加以改善峰型。对于离子型水溶性生物大分子(如蛋白质、核酸成分)可以选用凝胶过滤色谱和凝胶亲和色谱。选用样品的含量测定包括色谱样品前处理条件考察,条件得摸索和方法学验证等。
①样品前处理条件考察不同的样品、不同的方法是不同的,一般包括提取溶剂、提取时间,溶剂的加入量、溶剂的不同浓度、提取方式、不同酸碱环境下的提取效果等项目考察。
②条件摸索。色谱类方法主要包括:薄层板的选择、流动相(展开剂)种类的选择、展开剂的比例、显色剂、等度或梯度摸索、检测波长、流速、柱温等。条件摸索可以在参考别人论文的基础上进行优化,这样可以省却很多时间。
③方法学验证。每个方法都需要对该方法进行验证,验证通过之后才可以推广使用。包括
包括系统适应性(样品,对照品,理论塔板数,分离度,重复性、拖尾因子,阴性样品有无干扰)、线性关系考察(吸取不同体积的对照品,以对照品浓度和色谱峰面积作图)、精密度考察(对照品连续进样至少5针,内标法RSD不低于5%,外标法不低于10%)、加样回收(不同浓度对照品做6份,三份相同浓度对照品做9份),稳定性考察等。
⑹做完实验之后最好对该实验进行小结,对试验中发现的问题或需要注意的问题,以及在试验中排除掉的方法,以及选用方法的利弊等等。做完了之后都可以发表了。(O(∩_∩)O~)
如果还需要对样品中的其他成分进行检测,可以按照上述的方法重复进行,但是由于测定成分不同,上述操作有是些区别的。
二、成药的质量标准研究成药的质量标准和原料标准大同小异,成药标准比原料检测项目更全,成分更细致。
主要包括以下几方面的内容:
⑴处方、制法
处方和制法是国家标准已经有的,按照国家的规定制成。 当然如果是更换剂型或者国家还没有标准的处方,对处方的选择也需要摸索,这个下面再说。
⑵薄层鉴别或显微鉴别
显微鉴别,成药经过适当处理后,在显微镜下观察、描述并拍照片出来。
薄层鉴别,由于成药是几种原料的混合体,所以检测成分种类较多,所需对照品较多,鉴别条件相对比较复杂点。样品的处理与原料的不同,由于已经做成了不同的剂型,剂型不同处理方式有所差异,一般包括萃取,回流等。同时用同样的溶剂溶剂对照品和阴性对照液。接下来就是摸索薄层色谱条件。关键在于展开剂的选择。可以从有关报道上,从样品的种类和极性,从溶剂的极性等方面进行考察,选择一种展开效果好,Rf达到要求的条件。一般是几种或多种溶剂的混合溶剂作为展开剂。展开后,应该在对照品、对照药材中显示相同颜色的斑点,且阴性无干扰。