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主题：【专题讨论第一期】进样前的阅兵

浏览0 回复35 电梯直达
〓猪哥哥〓
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发表于：2009/09/15 07:18:50 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
【专题讨论第一期】进样前的阅兵




液相色谱【专题讨论】系列将对液相色谱中的诸多专题进行讨论，希望能够从中建议起一种标准操作模式，尽量减少实验操作或数据处理带来的误差，提升重复性和重现性。同时诚邀液相色谱版主和专家对该活动进行话题引到或推荐，同时期待版友的积极讨论和经验分享。

活动时间初步定为：2009-9-15至2010-1-1  半月谈

这一期讨论的有：
1、谁指导我第一次使用液相，强调最重要的一个细节是什么？
2、你的开机顺序（注明仪器名称）是怎么样的？为啥是这样的？
3、对于不同样品采用不同的前处理方法，如蛋白，糖类，黄酮，生物碱等。你做的样品是什么，经过怎么样的处理之后进液相呢？

第一期活动结束：2009-10-1
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2009/9/15 7:27:48 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1、谁指导我第一次使用液相，强调最重要的一个细节是什么？
第一次使用液相恰好碰到的是工程师过来安装和调试，从安装仪器到走样，工程师都给我们示范，而且由于一下就买了6台仪器，所以对安装和走样有了一个最初的印象。后来就是经过前辈一段时间的谆谆教诲。最开始由于还不是很熟悉，记得很深刻的就是“排气需开排气阀，做完样品冲柱子。O(∩_∩)O~”

2、你的开、关机顺序（注明仪器名称）是怎么样的？为啥是这样的？
Agilent1200，只要你想到了检测器，要好好照顾它，开机的顺利就定了O(∩_∩)O~。当然首先你得把各个模块摆放好了。从上到下依次为：溶剂瓶箱-真空脱气机-液相泵--自动进样器-柱温箱-检测器。
开机顺序是：从上到下
关机顺序是：从下到上。
检测器：晚点开，早点关。

3、对于不同样品采用不同的前处理方法，如蛋白，糖类，黄酮，生物碱等。你做的样品是什么，经过怎么样的处理之后进液相呢？
因为做指纹图谱，按照生产工艺要求，对样品的前处理水提醇沉，多次提取纯化，进样。前处理不复杂。你的呢？
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青林
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2009/9/15 8:26:25 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1、谁指导我第一次使用液相，强调最重要的一个细节是什么？
第一次使用液相是一个老员工教的,他也不怎么懂(后来一些仪器方法的制度都是我牵头建立的),说的最多的就是要细心,当然“排气需开排气阀，做完样品冲柱子”也常说。

2、你的开、关机顺序（注明仪器名称）是怎么样的？为啥是这样的？
Agilent1200，先开检测器（不开灯），让泵，再开恒温箱，再进样前30min打开灯源（节约），做样一结束，首先关检测器的灯（节约）和恒温箱，再关泵。最后才是检测器。这样做的目的就是延长灯使用寿命的前提下，最大程度检测仪器的使用情况。

3、对于不同样品采用不同的前处理方法，如蛋白，糖类，黄酮，生物碱等。你做的样品是什么，经过怎么样的处理之后进液相呢？
我们血液制品人血白蛋白，免疫球蛋白。前处理很简单，如果是做麦芽糖就要去蛋白（加磺基水杨酸）室温4h。
不管如何进样前都是要经0.45微米的滤膜。


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柏坡
hgycook
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2009/9/15 12:44:30 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
感觉液相的开机并不是很严格的规定，只要在各个模块都保持开启状态，然后再打开工作站才能实现联机。当然，为了节省灯，检测器可以先关待进样前再打开。安捷伦堆积式的码放有利于减少死体积降低柱外效应，更直观。
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东风恶
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2009/9/15 14:52:03 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
主要批处理信息是否正确，否则就是一时大意，将是重做啊！
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yangshaobo
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2009/9/15 17:59:20 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1、谁指导我第一次使用液相，强调最重要的一个细节是什么？
师兄指导我第一次使用液相，强调的最重要的一个环节就是换柱子时如何拆卸、安装柱子，再就是检测器不要经常开关。
2、你的开机顺序（注明仪器名称）是怎么样的？为啥是这样的？
用的是戴安的HPLC，好久不做了忘了具体型号，顺序是：打开泵，开始自检、洗泵，然后排气，然后打开检测器预热30min，打开变色龙工作站，设定流速、检测波长等，平衡基线，然后上样，做完样品用乙腈冲柱子。
3、对于不同样品采用不同的前处理方法，如蛋白，糖类，黄酮，生物碱等。你做的样品是什么，经过怎么样的处理之后进液相呢？
我们实验室做的是微生物活性物质的分离纯化，大多是一些多肽类物质，发酵液经硫酸铵盐析（或者大孔吸附树脂处理）、离子交换层析（或者分子筛层析、TLC）等处理，收集有效组分冷冻干燥后上HPLC，确定分离条件，再用制备液相制备，然后用NMRI测定其结构。
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知易行难
huangzhiqiao456
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2009/9/16 9:15:07 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1、谁指导我第一次使用液相，强调最重要的一个细节是什么？
第一次使用液相恰好碰到的是师兄（研究生），呵呵，排气的时候一定要把排气阀给打开了，然后，排完气后，要把排气阀给关上才能有压力。
2、你的开、关机顺序（注明仪器名称）是怎么样的？为啥是这样的？
岛津 LC-10AT 呵呵，很古老吧，我感觉啊，就是以前稍有钱的用的大多是岛津了，这个型号的比较普遍，也有挺好的精确度，很锻炼人的哦
开机顺序是：先开泵，再打开检测器，呵呵，都差不多了各种型号的。应为检测器是有寿命的，一打开，就意味着3个小时的寿命。
关机顺序是：先关泵，再关工作站，前提是你已经把柱子给冲洗好了
检测器：晚点开，早点关。

3、对于不同样品采用不同的前处理方法，如蛋白，糖类，黄酮，生物碱等。你做的样品是什么，经过怎么样的处理之后进液相呢？
我作的是生物碱兼萜类，我从药材的提取，到过柱子，然后在重结晶，定容，膜过滤（续滤液），进样
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小不董
doxw0323
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2009/9/16 11:56:27 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1、谁指导我第一次使用液相，强调最重要的一个细节是什么？
同事指导我第一次使用液相，强调的最重要的一个环节就是淋洗液要保证，流动相要要过滤。
2、你的开机顺序（注明仪器名称）是怎么样的？为啥是这样的？
用的是安捷伦的HPLC1100，顺序是：打电脑，启动后，开启仪器电源，淋洗液冲洗。（仪器配置了泵淋洗装置，用缓冲盐时一定不能忘记，用１０％的异丙醇）电脑接到信号后，打开工作站，（因为仪器都是电脑软件控制的）。选择方法，设定流速（一般先选择大流速3ml/min，打开purg排气泡，排完气泡后再选择方法中流速）、方法选择了就不用改变检测波长仪器设置等，平衡基线，然后设置样品批号，操作人员名字，数据保存地址等，上样，做完样品冲柱子。同时记录仪器开机性能指标，环境条件等。
3、对于不同样品采用不同的前处理方法，如蛋白，糖类，黄酮，生物碱等。你做的样品是什么，经过怎么样的处理之后进液相呢？
一般按照标准方法，新物质新方法，前处理不外乎要过滤，这是一定要做的。还要注意的是样品和流动相的溶解情况。
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羽香
shenyan1981
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2009/9/17 15:07:39 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1、谁指导我第一次使用液相，强调最重要的一个细节是什么？
是我的导师。正确操作仪器，完成课题研究。
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happy水中月
lianlxh
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2009/9/17 16:31:26 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1、谁指导我第一次使用液相，强调最重要的一个细节是什么？
单位里面的一个技工要调走了,临走前,领导交代给我,让我接.人家只是告诉我整个开机过程,自己拿说明书一点点学的.出现什么问题解决什么问题,90年代初期,仪器电子化程度比较低,还比较好学.
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柏坡
hgycook
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2009/9/17 19:28:49 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1、谁指导我第一次使用液相，强调最重要的一个细节是什么？
第一次接触应该是在学校了，当时好像是台岛津的10A，感觉很金贵的样子，老师做的示范，我们都看着。机器放置的房间比较好，整个空间都好像被毯子包裹起来了，呵呵。（是不是夸张了），老师说的最多的就是他那根进样针，总是强调它会弯调！再后来进了工厂，那时候才知道原来液相也能放在外面！

2、你的开机顺序（注明仪器名称）是怎么样的？为啥是这样的？
现在用的是岛津的机器，每天一开机后做的事就是purge，大概1个小时吧，然后才开始工作。

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