主题:【求助】荧光不断减少

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aiyi313
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做一个蛋白在缓冲溶液中的荧光。但是那个荧光值自己在不断的减少··根本没有达到一个平衡的时间。我用了6h的时间,荧光减少了一半。现在可以排除是蛋白变性·
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原文由 aiyi313 发表:
做一个蛋白在缓冲溶液中的荧光。但是那个荧光值自己在不断的减少··根本没有达到一个平衡的时间。我用了6h的时间,荧光减少了一半。现在可以排除是蛋白变性·


可能:

荧光标记的光漂白?
样品出现沉淀或分解?
aiyi313
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我的实验中,如果样品一直在荧光的那个暗室中,荧光会随着时间减少,如果我拿出暗室,荧光就会上升。因此我怀疑不可能是光漂白。我的样品是很稳定的不会产生沉淀等。
fragr
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原文由 aiyi313 发表:
我的实验中,如果样品一直在荧光的那个暗室中,荧光会随着时间减少,如果我拿出暗室,荧光就会上升。因此我怀疑不可能是光漂白。我的样品是很稳定的不会产生沉淀等。


很有趣的现象,请问:你提到的拿出暗室荧光就会上升,是什么意思?
aiyi313
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是的·因为我的荧光仪的光源是连续发射的,如果我的样品一直在暗室中,就一直接受着光源的照射。我拿出暗室后就没有光源照射,日光照射的能量低,也许是我的光源造成了光漂白?
fragr
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原文由 aiyi313 发表:
是的·因为我的荧光仪的光源是连续发射的,如果我的样品一直在暗室中,就一直接受着光源的照射。我拿出暗室后就没有光源照射,日光照射的能量低,也许是我的光源造成了光漂白?


也许是测量的设置问题。需要采用快速扫描回避光漂白。
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