主题：【资料】鼠药中毒检验方法系列讲座(共45讲)

鼠药中毒检验方法—2含氟杀鼠药的理化性质

  含氟杀鼠药有无机和有机两类，均为剧毒化合物，有机含氟杀鼠药是一些小分子量的酸、酰胺、醇等化合物的氟取代物；无机含氟杀鼠药，是一些水溶性的或易于分解出水溶性氟化物的无机化合物。本节以杀鼠药氟乙酰胺为主线介绍检验方法。

氟乙酰胺、氟乙酸、氟乙酸钠、甘氟均属常见有机含氟杀鼠药，氟乙酰胺、甘氟中毒后在体内多被代谢为氟乙酸，直接用GC分析氟乙酸不仅灵敏度不理想，而且体内的氨基酸等还有干扰，如对氟乙酰胺结构中的-NH2或-OH基团中的H进行衍生化，然后再用GC-ECD、GC-NPD进行分析，或直接浸提离心后用NMR进行分析，能得到较满意的结果。

氟化钠和氟硅酸钠属无机含氟杀鼠药,民间传统仍沿用来杀鼠，同时也用于杀虫和防腐。



氟乙酰胺又叫敌蚜胺、1081。纯品为白色针状结晶或白色粉末，无味无嗅，受热易升华，温度高于170℃时分解，熔点为107~108℃。易溶于水（1:5）、甲醇（1:8）、乙酸甲酯（1:11）、乙醇（1:16）、乙酸乙酯（1:22）、略溶于二氯甲烷（1:64）、氯仿（1:70）、微溶于乙醚（1:104）、苯（1:666），几乎不溶于石油醚。

在干燥条件下比较稳定，在酸性、中性水溶液中水解为氟乙酸，在碱性水溶液中为氟乙酸钠。其反应式如下：

        FCH2CONH2 + H2O → FCH2COOH + NH3↑

        FCH2CONH2 + HCl → FCH2COOH + NH4Cl

        FCH2CONH2 + NaOH → FCH2COONa + NH3↑

氟乙酸是一种比醋酸强的有机酸，易挥发，熔点33~35℃，沸点165℃，能溶于水和乙醇。氟乙酸钠又叫1080、氟醋酸钠，纯品为白色粉末，加热至200℃时分解，有吸湿性，极易溶于水，微溶于丙酮、乙醇和油类。

甘氟是两种氟丙醇的混合物，二氟丙醇（C3H6OF2）占70~80%，氟氯丙醇（C3H6OFCl）占20~30%，比重为1.25~1.27，沸点120~132℃，不易分解却较易挥发。

氟化钠（NaF，41.99）为白色或淡灰色结晶或无定形粉末，无臭无味，不溶于乙醇，溶于水，水溶液略呈碱性，遇酸分解产生氟化氢。

氟硅酸钠（Na2SiF6，188.1）为白色或带灰色细小结晶或结晶形粉末，无臭无味，不溶于乙醇、微溶于水，易溶于酸性溶液生成氟硅酸，加热氟硅酸分解为氟化氢和四氟化硅气体，在碱性溶液中生成氢氟酸和硅酸盐白色沉淀。

鼠药中毒检验方法—3含氟杀鼠药的毒性与中毒症状



㈠  毒性

氟乙酰胺、氟乙酸钠、氟乙酸和甘氟等均具有接触、熏蒸、内吸作用的高效有机氟杀鼠药，能消灭鼠害还能杀死多种农业害虫。由于生产合成容易、价格低廉、无嗅无味、配制方便，深受使用者的欢迎。但因它们的毒性很大，并有二次中毒的特性（人吃了氟乙酰胺中毒死亡的猪脏器后，再次发生中毒死亡），因而我国已停止生产，并禁止使用。近年来这类鼠药不仅土法生产泛滥，而且名称繁多，到处可获得。已成为我国刑事案件中的常见毒物案。 

氟乙酰胺对人口服0.1~0.5g可中毒死亡，对狗比较灵敏，0.2~0.5mg/kg可中毒死亡，对牛的致死量为2~2.3mg/kg；氟乙酸钠人口服的致死量为0.7~5mg/kg，对大鼠口服LD50为13mg/kg，小鼠口服LD50为4mg/kg，豚鼠口服LD50为1mg/kg，白兔口服LD50为33mg/kg。

氟乙酸和氟乙酸钠的毒性比氟乙酰胺强，大鼠口服LD50为0.22mg/kg

甘氟因挥发性较强，可经呼吸道中毒。大白鼠口服LD50 为30mg/kg

氟化钠对大白鼠口服LD50为200mg/kg，对人致死量为1~5g。氟硅酸钠对大白鼠口服 LD50为123mg/kg。



㈡  中毒机理

氟乙酰胺和氟乙酸钠及甘氟进入生物体内后均易被水解形成氟乙酸，在辅酶A等的作用下，代谢成为高毒的氟代柠檬酸及其盐，由于氟代柠檬酸在体内的蓄积，使柠檬酸含量比正常量大8~80倍，从而抑制乌头酸酶的活性，妨碍柠檬酸的氧化，体内三羧酸循环被中断，引起机体代谢功能发生障碍，最终造成神经系统的损害。此外，对心脏也有明显的损害，导致心律紊乱，心室颤动，出现反复发作性的痉挛等。



㈢  中毒症状

1、  人的中毒症状：一般口服后30min~2h出现症状，有的潜伏期更长4小时才出现症状一旦出现了症状，发病较急。主要有恶心、呕吐、头痛、头晕、四肢无力、寒战、口渴、上腹部有烧灼感、疼痛、烦燥不安、视力丧失、碰到障碍物就倒下，立即产生阵发性抽搐，颈强直等症状。最后因昏迷、抽搐、呼吸抑制、心力衰竭而死亡。食用氟乙酰胺中毒死亡的家畜内脏后，可引发二次中毒。二次中毒出现症状较晚，症状也较轻，表现为恶心、呕吐、口渴、四肢无力等症状，出现死亡时间也较长。

2、兔的中毒症状：精神萎靡不振，四肢无力，站立不稳，呼吸微弱，然后出现间歇性痉挛，间歇时间越来越短，最后剧烈抽动，大声尖叫、倒气直至死亡。解剖症状：胃粘膜广泛脱落、心和肝均出血。

鼠药中毒检验方法-(4) 氟乙酰胺在动物体内的分布

    动物兔经氟乙酰胺中毒后，体内可同时检出氟乙酰胺及氟乙酸。氟乙酸钠中毒后，体内以氟乙酸或氟乙酸钠存在。用氟乙酸钠及氟乙酰胺对家兔进行中毒实验。是将不同剂量的药物伴入馒头或蔬菜中，让其自然进食，中毒死亡后解剖，取各脏器、体液、和大腿部位的肌肉，剪碎后冰冻保存。取各检材1.0g (mL)进行分析，首先用丙酮/水（4:1）浸提、超声半小时，挥去丙酮，将水液调成酸性，乙酸乙酯提取，在胺碱条件下挥干溶剂，经五氟苄基溴衍生，GC-ECD分析，实验条件和体内分布结果见下表-1


80年国外对狗和喜鹊等动物进行了1080中毒实验，美国Iwao okuno教授采用插管方法将1080投入动物体内，取各检材1.0g(mL)进行分析，结果见表-2表-3

鼠药中毒检验方法-5各种方法检材前处理

㈠  有机氟杀鼠药中毒生物检材前处理方法

1、 GC-ECD方法的前处理：

  1.1  对照样品制备：取空白胃或肝组织各2克，添加5~10μg氟乙酸钠 (浓0.01mg/mL)，混匀作阳性对照。同时取相同的空白组织2克平行操作，作阴性对照。
  1.2  提取方法：用丙酮水 (4:1) 5mL×2进行超声振提半小时，再浸提或放置过夜，离心后将浸提液浓缩至约2mL水液后，再离心吸取上清液用苯2~3mL振提半分钟，苯振提的目的，一方面为净化洗涤，另一方面可用来同时排除毒鼠强及常见的有机磷农药。苯洗涤后的水溶液用2mol HCl调pH2左右，用乙酸乙酯5 mL×2提取数分钟，离心分出上层乙酸乙酯，在合并的乙酸乙酯中加入0.2mL 10%三乙醇胺丙酮液，混匀，在60~70℃下挥干备用。
  1.3  衍生化方法：在挥干提取液的试管中，加入约0.5g无水硫酸钠和0.1g无水碳酸钾，再加100μl 的10%五氟苄基溴丙酮液，加2mL丙酮，盖严混匀，于微波炉中最低档加热2分钟 (或60℃下加热30分钟) 使其衍生化，取出振摇混匀、离心，上清液可进行GC-ECD分析。

2、 GC-NPD方法的前处理：

  2.1  对照样品制备：取空白兔肝1.0g，添加氟乙酰胺纯品5μg (浓度0.01mg/mL)，混匀作阳性对照。同时取相同的空白组织1.0g平行操作，作阴性对照。
  2.2  提取方法：用丙酮水 (4:1) 5mL×2进行超声振提半小时，然后再振摇5分钟，合并在80℃下空气吹浓缩至<1mL，离心在上清液里再加2mL左右的丙酮，再浓缩至<1mL用苯洗涤一次，离心（苯液用于检验毒鼠强和有机磷农药），上清水溶液备用。
  2.3  衍生方法：将上一步的水溶液调为近中性，加100μl衍生化试剂DEPA及100μl催化剂DDC，用2mL×2乙酸乙酯强振5分钟，使其衍生及萃取，离心，分出乙酸乙酯合并，在60~70℃下用空气吹干，加200μl乙醇溶解残渣，然后进行GC-NPD定量分析。

3、 GC-FID方法的前处理
  3.1  对照样品制备：取空白血（血站购得）1.0mL两份，其一添加氟乙酰胺纯品5μg，混匀作阳性对照。其二用于平行操作，作阴性对照。
  3.2  提取方法：用丙酮水 (4:1) 5mL×2进行超声振提半小时，然后再振摇5分钟，离心合并提取液，在80℃下空气吹浓缩至<1mL，离心在上清液里再加2mL左右的丙酮，再浓缩至<0.5mL，再用甲醇定容到0.5mL，供GC-FID定量分析。

鼠药中毒检验方法—6各种方法检材前处理





4、HPLC方法的前处理

用反相柱分析1081或1080，一般取生物检材2g(mL)，相应的空白生物检材各2g(mL)两份，其一作阴性对照，另一份添加5μg被测成分作阳性对照，将以上三个样品用乙腈水（4:1）各5mL×2提取、分别离心合并，挥至<1mL后再离心，上清液再挥至近干，定容添加色谱流动相（乙腈∶ 乙酸乙酯∶水- 9∶2∶2），必要时用微形柱再净化一次，供HPLC分析



5、薄层色谱法前处理

  同GC-NPD方法的前处理，取已衍生好的残渣乙醇液点在带荧光的高效板上。



6、硫靛反应的前处理

取生物检材5~10g用甲醇水（7:3）50mL浸提过夜，超声半小时后离心，上清夜在水浴上挥至约 5~10mL备用



7、核磁共振方法的前处理

取生物检材1~2g（胃内容、胃组织、肝组织等）剪碎后，用水振提，超声半小时后离心，取上清液供NMR分析。



㈡  有机氟杀鼠药粉末和毒饵的前处理

粉末和毒饵的前处理可适用任何分析方法，只是不同的分析法使用不同的溶剂，如GC-ECD、GC-NPD和GC-FID方法可用甲醇或丙酮溶提，NMR和HPLC方法用水溶提即可，HPLC方法溶提粉末和毒饵时，最理想的溶剂是分析时用的流动相。



㈢  无机氟杀鼠药中毒的前处理

1、无机氟杀鼠药粉末和毒饵的前处理。先用水浸提、离心后供检氟、硅和钠元素，含氟的各种矿石和粉末如氟石等多种硅酸盐均不溶于水，以利于排除干扰，可直接进行元素分析。

2、无机氟杀鼠药的生物检材前处理。取生物检材5~10g与氢氧化钙混匀后，置于坩埚中，表面再盖上一薄层氢氧化钙，在通风柜内小火加热至不冒烟止，转入400℃高温炉灼烧灰化4小时备用

鼠药中毒检验方法-7含氟杀鼠药HPTLC法①

氟乙酰胺、氟乙酸和氟乙酸钠（钾）等含氟杀鼠药的鉴定方法有薄层色谱法、气相色谱法和气-质联用法等，下面分别介绍。
1970年，Perry,V.A报导了氟乙酸钠用氯仿提取，硅胶G板点样，苯或乙醇∶氨水（96:4）展开，硝酸银液显色，即在白色背景下显灰色斑点，可检出0.1μg氟乙酸钠。1990年，Williamj介绍了用Whatmank2薄层板（一种微晶纤维布）点样，乙醇∶氨水∶吡啶∶水（95:3:1:1）展开，0.4%尼罗兰显色，斑点为鲜兰色。氟乙酸钠和氟乙酰胺直接用HPTLC分析显色后，再用其与N,N-二乙基对苯二胺（DEPA）衍生化后的衍生物进行HPTLC分析，准确度有所提高，下面介绍这二种薄层色谱法。

样品1：为氟乙酸和氟乙酰胺和生物检材经硫靛反应的氯仿提取浓缩液
吸附剂：硅胶HPGF254（青岛海洋化工厂生产）
展开剂：环己烷∶丙酮（4:1）
            乙酸乙酯∶丙酮（4:1）
              氯仿∶乙醇（5:1）
显色剂：硫靛反应产物本身为鲜红色条状斑点。灵敏度为1.0~2.0μg

鼠药中毒检验方法系列讲座（8）—含氟杀鼠药检验方法-②


㈠  有机氟的化学分析法
1、 硫靛反应 
    氟乙酰胺的化学分析法是用硫靛反应，该反应在实践中发现有部分干扰，使鉴定中出现假阳性可能，为了解干扰情况，下面将介绍各种检材的硫靛反应结果。
1.1  硫靛反应原理
    含氟乙酰基的化合物，在强碱性条件下与硫代水杨酸作用后，再经铁氰化钾氧化后生成红色的硫靛化合物，该反应可用于检验氟乙酰胺和氟乙酸，检识限约为10μg


1.2  分析步骤：取前处理溶液约10~12mL于蒸发皿中加50%NaOH溶液1mL，硫代水扬酸0.2g，混匀使白絮状沉淀溶解，放入120℃烘箱中加热反应18小时，冷后取出加3~5mL 5%铁氰化钾溶液彻底溶解器皿壁，转入试管中，加2mL氯仿振摇提取30秒，离心，若底层氯仿液变红色即呈阳性反应。注意其他含卤代乙酰基的化合物也有相同的反应。
1.3  干扰实验：
按上述硫靛反应对以下空白样品进行分析，反应结果如下表



该分析方法虽然时间长，灵敏度低，当没有仪器设备和有关试剂时，配合其它鉴定方法及同时做空白阴性对照和空白添加阳性对照实验，一般控制反应温度在130~160℃之间2h左右，阳性干扰少，还可以用作中毒案件的鉴定。
2、 升华试验和氨的试验
这二种方法只适合分析非生物样品的筛选，氟乙酰胺或氟乙酸含量较大的检材。
2.1  升华试验：样品放在小试管中或玻片上，用小火缓缓加热样品处，使升华物凝结于试样上方的冷玻壁或玻片上，然后在显微镜下观察是否有氟乙酰胺的白色针状结晶。
2.2  氨的试验：氟乙酰胺与强碱性的纳氏试剂反应能生成橙红色沉淀，但铵盐或能分解产生氨的化合物皆有此反应。