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主题：【求助】梯度洗脱的做法

浏览0 回复10 电梯直达
violet0569
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发表于：2010/01/28 15:30:09 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最近做氨基酸的分析，要用到梯度洗脱，请各位高手指点一下。

  我知道一般梯度洗脱都应该用初始条件平衡色谱柱，然后再运行两个空白梯度。可是文献上大部分氨基酸分析的初始条件都是用纯缓冲液冲0.5-1min,然后再逐渐升高有机相的比例。我用的是C-18柱，如果用纯缓冲液平衡色谱柱，会不会对柱子有影响？不是说用纯水冲容易使柱子的烃基毛倒伏，并缩短柱子寿命吗？

  另外，我用的是岛津的液相，流动相体系是：A 缓冲盐  B 60%的乙腈。岛津的液相使用纯乙腈体系容易使单向阀中的宝石求粘连，这样的话我能不能使用贾春来封柱子，使用时再用乙腈体系平衡？由于流动相是乙腈体系，我不知道用甲醇封柱子会对实验重现性方面产生影响吗？

谢谢啦！！！
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2010/1/28 16:06:40 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
能不能用纯水主要看柱的特性，Waters的反相柱就可用100%的水相，但工程师会建议您中途不要停流速，用完后切换到有机相；当然，如用缓冲盐，应先水把盐去得差不多了，再切换到有机相，以免盐析出。
“岛津的液相使用纯乙腈体系容易使单向阀中的宝石求粘连”这个有根据吗？
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happy王子矜
wangzijin
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2010/1/28 16:16:29 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果你要保存柱子，不一定用纯乙腈，90%的也可以。这样切换简单。
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有水有渝
xky0230699
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2010/1/28 17:26:37 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流动相比例可以根据自己仪器状况调整试一下，没有必要完全按文献的做法。
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diaryfly
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2010/1/28 17:30:46 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我平时都是用90%的乙腈水来保存的!
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diaryfly
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2010/1/28 17:32:21 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 violet0569(violet0569) 发表:
最近做氨基酸的分析，要用到梯度洗脱，请各位高手指点一下。

  我知道一般梯度洗脱都应该用初始条件平衡色谱柱，然后再运行两个空白梯度。可是文献上大部分氨基酸分析的初始条件都是用纯缓冲液冲0.5-1min,然后再逐渐升高有机相的比例。我用的是C-18柱，如果用纯缓冲液平衡色谱柱，会不会对柱子有影响？不是说用纯水冲容易使柱子的烃基毛倒伏，并缩短柱子寿命吗？

  另外，我用的是岛津的液相，流动相体系是：A 缓冲盐  B 60%的乙腈。岛津的液相使用纯乙腈体系容易使单向阀中的宝石求粘连，这样的话我能不能使用贾春来封柱子，使用时再用乙腈体系平衡？由于流动相是乙腈体系，我不知道用甲醇封柱子会对实验重现性方面产生影响吗？

谢谢啦！！！

没有必要一定用甲醇来保存的!乙腈也可以
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安平
byron1111
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2010/2/2 23:24:59 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可以用70%乙腈水溶液保存柱子
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violet0569
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2010/2/4 13:49:51 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢大家的回复 学习了
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taolf
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2010/2/4 14:58:37 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 muziying114(muziying114) 发表:
能不能用纯水主要看柱的特性，Waters的反相柱就可用100%的水相，但工程师会建议您中途不要停流速，用完后切换到有机相；当然，如用缓冲盐，应先水把盐去得差不多了，再切换到有机相，以免盐析出。
“岛津的液相使用纯乙腈体系容易使单向阀中的宝石求粘连”这个有根据吗？

我用岛津的液相也是这情况,乙腈比例高了,单向阀就堵,基本上无法做梯度
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安平
byron1111
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2010/2/10 14:43:10 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用乙腈-水体系就可以。
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东风恶
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2010/2/10 21:00:35 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 安平(byron1111) 发表:
用乙腈-水体系就可以。

这样是做好的方法啊！
一个是不会用太多时间去配制流动相。
乙腈和水下次做氨基酸分析平衡很快。
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