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主题：【转帖】HPLC技巧：在宽流速范围使用小粒径填料提高分离效率

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儒雅凤
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发表于：2010/02/28 14:04:35 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊


    许多实验室都面临由HPLC色谱柱（常规规格4.6 mm x 15 cm或 25 cm，填装5 µm填料）开发的HPLC方法与不断增加的样品分析数量之间的矛盾。这些实验室希望在不损失色谱性能的前提下，通过改变原有方法来缩短分析时间。从色谱理论来讲，5 µm 填料在流速为0.8 mL/min时具有最好的柱效，但实际上线速度经常会超过2 mL/min。因此实验室损失了柱效，峰形也不尖锐。重新获得柱效的最简单办法是改用更小粒径填料的色谱柱。


使用3.5 µm填料缩短三分之一的分析时间

    要在不损失分离度的条件下提高分离速度，可以有多种选择。可以使用2 µm或 2.5 µm的填料，但在更高流速下不能保持高柱效。它们与3.5 µm的填料相当，但后者的的反压更低。另一种选择是整体柱，其柱体结构为均一的刚性或半刚性高分子多孔棒。在宽流速范围内该色谱柱能够保持柱效，其柱效同样可与3.5 µm的多孔填料相当。那么为什么不都选用3.5 µm 的填料呢？3.5 µm填料15厘米长色谱柱的柱效与5 µm填料25厘米色谱柱的柱效相同，但前者的优势是分析时间缩短33%。如果两个规格的色谱柱使用同样的固定相，选择性会保持不变并且没有必要再开发新方法。


使用1.8 µm填料会节省更多时间

    基于这一概念，使用1.8 µm 填料的75 毫米色谱柱分析时间节省66%。亚 2 µm 填料的优点是在更宽的线速度范围内依旧能保持高柱效。因此可以在更高流速条件下使用该色谱柱以进一步缩短分析时间。更短的色谱柱还能够节省相当可观的溶剂消耗并减少废液处理量。


方法调节简单

    使用更小粒径的色谱柱，可能需要对分析方法做稍微做些修改。在进行同位素分析时，缩短分析时间如同更换色谱柱一样简单。然而为了保持梯度分析的色谱分离度，必须按照与柱长的减少成比例（或与流速的增加成比例）地缩短梯度时间。当更换为更短的色谱柱时，还需要减少进样量。
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安平
byron1111
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2010/2/28 21:16:04 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢分享。

  可能有笔误，线速度的单位不是ml/min
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