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主题：【求助】用三氯化铝作为显色剂测总黄酮含量

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tylerconan
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发表于：2010/04/06 21:12:39 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
三氯化铝法测定总黄酮的含量，基本上还是可靠的，但对有些样品本身颜色就比较黄比较 深的，我就先用活性碳脱色了，然后再稀释再去与三氯化铝显色，可是却出现了如下 情况 ：加入三氯化铝的样品颜色反而浅，样品本身做对照的倒是颜色深，这样一来就没法 代入标准曲线去计算了，因为减去空白后就是负值，请问这是为什么？如何解决？
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zlhuang0132
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2010/4/7 0:42:10 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这可能是活性炭也将黄酮大部分地吸附了。三氯化铝溶液的加入显色不明显（黄酮含量太低），反而是稀释效果更明显，因而溶液颜色变淡（颜色可能不是黄酮了）。建议从紫外区再选黄酮有吸收的波长，进行紫外吸收测定或双波长双光束测定，可以消除背景色的影响。
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2010/4/7 9:22:30 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zlhuang0132(zlhuang0132) 发表:
这可能是活性炭也将黄酮大部分地吸附了。三氯化铝溶液的加入显色不明显（黄酮含量太低），反而是稀释效果更明显，因而溶液颜色变淡（颜色可能不是黄酮了）。建议从紫外区再选黄酮有吸收的波长，进行紫外吸收测定或双波长双光束测定，可以消除背景色的影响。


十分感谢您的建议。我用活性碳脱色，但其实效果并不明显，颜色还是很黄的。
所以我才只好又稀释。
稀释的倍数大（如100倍），颜色就太浅，稀释10倍的话，浓度又超过了标准曲线浓度的范围。

我按照您说的我再试一下。
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2010/4/7 9:26:09 Last edit by tylerconan
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2010/4/7 11:09:08 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
建议从紫外区再选黄酮有吸收的波长，进行紫外吸收测定或双波长双光束测定，可以消除背景色的影响。

我试了，从190-1000nm 全扫了一遍，最高的波形出现在435nm，原来做标准曲线是417nm。现在偏移了这些，有问题吗？
不过倒是加显色剂的样品 吸光度比 不加的高，这个问题倒是解决了。
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2010/4/7 12:44:27 Last edit by tylerconan
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