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主题：【求助】离子交换蛋白洗脱不下来？

浏览0 回复4 电梯直达
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发表于：2010/04/18 20:11:56 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
采用Agilent的zobrax SAX （强阴离子柱）4.6*150。蛋白样品：BSA 分子量约60kDa，pI=4.8。上样浓度1mg/ml，进样50ul，流速：0.8ml/min，280nm紫外检测。

流动相 A 20mM，pH7磷酸钠buffer，B：A+1M NaCl。

程序
0～15min：100％A；
15～45min：梯度B至100％；
45～50min：100％B

没有蛋白样品峰

我尝试过pH6.5，6.0的buffer，也尝试过pH8.0的Tris－HClbuffer，B的洗脱盐尝试过1M硫酸铵。以上条件均无法洗脱出蛋白峰。

直接0.5M NaOH再生柱子可以从柱子上洗脱出峰。

离子交换一般用NaCl或者硫酸铵即可。很奇怪，BSA上样后没有洗脱峰，不知诸位版友有和建议？
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2010/4/19 18:29:46 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你这属于“卤水点豆腐”了。。。。
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hmzhou83
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2010/4/21 17:46:14 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 初晶古恒(zrtt) 发表:
你这属于“卤水点豆腐”了。。。。


是不是柱子不合适???
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初晶古恒
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2010/4/28 9:43:24 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不是柱子不合适,是你的流动相不对.盐分过高会导致蛋白质凝聚,就跟做豆腐的原理一样了.

你去查查合适的流动相吧.
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Ins_8c66c4e4
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2024/4/29 16:25:15 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我也遇到了同样的问题，最后您是怎么解决的？
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