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液相色谱（LC）
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主题：【求助】求助大家：液相色谱如何准确定量分析？

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niuniu_ts
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发表于：2010/05/11 14:51:49 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
各位兄弟姐妹，大家好。实验中遇到不顺，真诚的请教大家。
我做的是苯酚羟基化反应，产物中有苯酚，苯二酚（邻，对），苯醌，焦油，用安捷伦1100液相色谱分析，外标法计算选择性和转化率。但一直以来，计算出的结果老是差强人意。偶尔算出一个好的结果，但是一重复又不行了，有时候重复做几次都不一样，很是郁闷。
最近又老算出来选择性超过100%。开始怀疑稀释误差的问题（样品是稀释以后去测的)，但现在操作的时候非常小心了，怀疑标准曲线的问题，但是重新做了好几条了。但结果就是很奇怪，自己想了想：
1.因为液相色谱仪是公用的，所以特意买了专用的色谱柱。但经常测的时候发现柱压不一样，是不是因为这个影响了峰面积，进而影响了结果？柱压的影响这么大么？
2.是不是外标法就不准确？该用单点校正法？之前觉得每次测样前都配一个标样有点麻烦，所以没用。
3.还是别的什么原因？
我用的柱子是ZORBAX SB-C18, 用的甲醇：水=3：7，每个峰都分的很开。取样后离心去掉催化剂，再定量稀释然后去测的。
因为分析的问题有时候做实验都怕是白做，很着急，希望好心人和懂的高手给予指点，不胜感激，谢谢了，祝你们学业事业有成。
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niuniu_ts
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2010/5/12 9:24:10 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有没有高手帮下忙啊？
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netsking
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2010/5/12 9:39:47 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
安捷伦1100液相色谱仪应该很稳定的. 如果液相平衡时间足够长, 应该每次重复不会超过3%. 如果仪器是多人使用, 你在用之前, 先做系统误差评估, 就是连续注射十几或几十针样品, 比如丙酮(270nm), 看一看误差. 如果没有问题,然后再做你的样品.
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mifeng7530
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2010/5/12 10:02:28 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主，定量重现性不好，你可以看一下进样量最好用定量环，别外峰分的开不能完全代表结果好，应不加样品走一下空白看一下在目标峰处有没有杂质峰。还有就是进样的浓度要适中太高和太低都不好，样品的浓度要在曲线的范围之内。溶解样品的溶液尽量与流动相一样。
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青林
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2010/5/12 10:21:11 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
手法看看有没有问题。尽量排除人为的因素
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johne0212
JOHNE0212
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2010/5/12 10:52:05 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
定量分析中用外标法确实不太准确,特别是涉及到样品需要经过复杂提取过程才能进样分析.
我的个人建议是:

1.柱压得变化浮动不大的话不会影响定量的准确性,如果你感觉柱压一直很稳定就不用考虑这个,另外,推荐你在进完一针样品以后,进一针空白,你看一下你的柱子是不是有问题,是不是它影响了柱压,是不是有残留.

2.如果您找不到好的内标,一定要用外标法进行定量,建议您先配好一个高浓度的标准备份液,每一次做实验之前都要重新配备一下您不同LEVEL的标准液,在进样品之前先进一系列的标准液,然后进样品,如果您的样品比较多,建议您每隔5个样品插一个标准品作为您的QC样品,当这个Sequence进完之后,你计算一下你的QC样品的值之间的差别是多少,如果差的太多比如2SD,您就要重新检查和分析这个序列.
您可以自己观察一下标准液的稳定性.在不同时间段内进同一个level的标准品看看是否有变化.
3.内标法,如果您能找到一个和您分析物质性质或化学结构相似的内标的话,最好用内标,在您处理样品之前就要把内标加进去,这样用内标可以纠正您样品提取,人为操作一系列的误差.
4.关于液相这边应该不会出什么问题,您如果对液相稍微懂一些就应该不会出什么原则性的差错.
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xyhdcm2002
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2010/5/12 11:55:22 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看来你得做做方法的验证，看看方法就竟有没有问题！！
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niuniu_ts
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2010/5/12 21:06:40 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
前面你提到的我都做了，最后一个溶解的问题。我用的流动相甲醇：水=3：7，那么我配标样时也要用两者的这种比例进行溶解吗？之前我是就用水来溶解的
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niuniu_ts
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2010/5/12 21:07:29 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 mifeng7530(mifeng7530) 发表:
楼主，定量重现性不好，你可以看一下进样量最好用定量环，别外峰分的开不能完全代表结果好，应不加样品走一下空白看一下在目标峰处有没有杂质峰。还有就是进样的浓度要适中太高和太低都不好，样品的浓度要在曲线的范围之内。溶解样品的溶液尽量与流动相一样。


前面你提到的我都做了，最后一个溶解的问题。我用的流动相甲醇：水=3：7，那么我配标样时也要用两者的这种比例进行溶解吗？之前我是就用水来溶解的
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rubyyuan8006
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2010/5/13 12:40:20 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看来楼主的系统不是很稳定，影响了你的结果
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