主题：【在线讲座33期】液相色谱柱使用疑难问题解析(答疑结束）

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plexu您好！我有以下问题想请教：
C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中，会对柱子有什么损坏吗？ph在2左右。

pH2左右容易使键合在硅胶基质上的固定相水解流失，包括C18和封尾试剂的水解，封尾试剂相对更容易水解。不知道你保存的酸性环境是不是含有缓冲盐，如果不含缓冲盐，只是短期几天保存在酸性流动相中，也不必过份担心，最多相当于这几天一直在使用这根色谱柱，因此减少几天的使用寿命吧；有缓冲盐就麻烦一点，保存期间水分挥发可能会导致缓冲盐结晶在柱内析出，对柱子损伤很大。

没有缓冲盐的，那就好，但是对于峰形的问题还是很发愁，昨天还出了一个问题，同一个样品，在一台仪器上出来时分叉的峰，在另一台是一个峰，并且纯度还蛮高的，出封时间在8-10min，不知道咋办了，所用的条件应该是一样的

那就是两仪器柱子的问题咯，你用同一根柱子在两台仪器上做下看看

这倒是没试
因为仪器不是我们实验室滴
那柱子出了什么问题，会造成这样的结果呢？
是柱子的键合相流失的原因么？

一般是柱子脏了，或者固定相坍塌了，把柱子反冲下就好了，这个很容易搞定的

可是，那为什么走别的样就好好的呢？
还有没有是别的原因造成的呢？
反冲，一般选用什么试剂，有什么需要注意的吗？以前没有反冲过

那我估计就是你样品的问题，你样品是拿流动相溶的不？注意溶剂强度不能大于流动相强度。还有，你样品PH值调了没？你调样品PH值做下看。

样品一般是用水溶的，流动相是乙腈和水，有的样品好好的，有的样品分叉，样品从来没有测过PH，实验室没有ph计。
今天测柱效，发现峰性不对称，是不是柱子塌陷了呢?如何评价柱效？

柱头被污染，会出现裂峰还有拖尾。如果柱头塌陷了，测所有样品都会有裂峰，你这种部分样品产生裂峰的现象，估计是柱头污染的可能比较大。

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plexu您好！我有以下问题想请教：
C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中，会对柱子有什么损坏吗？ph在2左右。

pH2左右容易使键合在硅胶基质上的固定相水解流失，包括C18和封尾试剂的水解，封尾试剂相对更容易水解。不知道你保存的酸性环境是不是含有缓冲盐，如果不含缓冲盐，只是短期几天保存在酸性流动相中，也不必过份担心，最多相当于这几天一直在使用这根色谱柱，因此减少几天的使用寿命吧；有缓冲盐就麻烦一点，保存期间水分挥发可能会导致缓冲盐结晶在柱内析出，对柱子损伤很大。

没有缓冲盐的，那就好，但是对于峰形的问题还是很发愁，昨天还出了一个问题，同一个样品，在一台仪器上出来时分叉的峰，在另一台是一个峰，并且纯度还蛮高的，出封时间在8-10min，不知道咋办了，所用的条件应该是一样的

那就是两仪器柱子的问题咯，你用同一根柱子在两台仪器上做下看看

这倒是没试
因为仪器不是我们实验室滴
那柱子出了什么问题，会造成这样的结果呢？
是柱子的键合相流失的原因么？

一般是柱子脏了，或者固定相坍塌了，把柱子反冲下就好了，这个很容易搞定的

可是，那为什么走别的样就好好的呢？
还有没有是别的原因造成的呢？
反冲，一般选用什么试剂，有什么需要注意的吗？以前没有反冲过

那我估计就是你样品的问题，你样品是拿流动相溶的不？注意溶剂强度不能大于流动相强度。还有，你样品PH值调了没？你调样品PH值做下看。

样品一般是用水溶的，流动相是乙腈和水，有的样品好好的，有的样品分叉，样品从来没有测过PH，实验室没有ph计。
今天测柱效，发现峰性不对称，是不是柱子塌陷了呢?如何评价柱效？

柱头被污染，会出现裂峰还有拖尾。如果柱头塌陷了，测所有样品都会有裂峰，你这种部分样品产生裂峰的现象，估计是柱头污染的可能比较大。

那应该怎么去维护柱子呢？
有没有详细的方法呢？
现在我应该怎么去做？如何再生柱子呢？非常感谢。

原文由 plexu(plexu) 发表:

原文由 老多_小多(emoc98311) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教：

通常我们在分析天然药物成分的时候结构复杂，无法考察组分的PKa值，哪我们如何去选择最合适的流动相或者是拖尾该怎么改善呢？

如果天然产物中没有易电离的极性基团，就不需要用缓冲盐调节pH。如果天然产物中既有酸性基团，也有碱性基团，譬如有pKa=6.2的羧基和pKa=9.0的氨基的两性物质，建议将pH用磷酸盐缓冲盐控制在2.4（如果是诸如月旭的Ultimate LP-C18这样的耐酸色谱柱，还可以调得更低）。如果pH控制在6.2-9.0之间，两个基团都处于离子态，保留能力最差，是最不可取的。如果不清楚复杂物质中含有什么基团，也请将pH调到2.4或更低。因为pH调低，起码抑制了酸性基团的电离而处于中性分子状态，而增加酸性基团这个部分在反相色谱中的保留能力；另外低pH还抑制了硅醇基的活性，有利于获取对称的峰形。
情况不明时候，为什么不建议调高pH呢？一方面一般色谱柱都不能承受pH9以上的条件；即使是像月旭的Xtimate系列一样能耐12.5的柱子，调高pH和调低pH相比，还有一个硅醇基活性大的劣势。

原文由 yongzhbenq(yongzhbenq) 发表:

原文由 zhwx0406(zhwx0406) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教，
　请问：1、采用国标用C18柱测定辣椒精辣度，将辣椒精中添加吐温系列乳化剂做成水溶辣椒精，请问乳化剂对C18柱是否有影响？
        2、公司按照国标测定辣椒红色素中苏丹红含量，标品分离很好，峰也不错，但是辣椒红色素由于跟苏丹红性质很相似，且颜色较深，分离效果很差，收得率很低，测定结果偏差很大。该如何处理样品？色素是否会降低柱效？
谢谢！！

你这里首先不能考虑对色谱柱有没有影响，而是你的这个方法学有没有问题
不知道您那边的加样回收率做的情况如何？如果回收率偏差很大，说明样品前处理有点问题，可能需要用到液液萃取或者固相萃取

原文由 xhj0804(xhj0804) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问:磺化交联的苯乙烯-二乙烯基共聚物为填充剂的色谱柱在储存过程未注意放在冰箱中，导致发霉后，柱效急剧下降，能何种方法将此色谱柱修复好，谢谢！