主题:【分享】SPE柱的几点经验

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乐果
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使用固相萃取柱的几点经验



1.流速方面,尽量慢

我们在使用固相萃取柱时,都要问清洗液用多大量,用多大流速才能得到最好的分离效果,我的经验是,要想效果好,流速就要慢,尽量慢。

对于固相萃取柱的分离原理,主要是靠固定相吸附剂上的官能团与目标化合物的官能团之间的作用力将目标化合物保留在固相吸附剂上,而没有被保留的样品基质则通过固相萃取柱。我们将填料放大就能够看到其实它们是有很多的空隙,,如果流得快,待测物还没有充分作用就从孔隙中流出了,所以要慢,给它们一个充分作用的机会。

怎样降低流速呢?窍门就是在能达到要求的情况下,,不要使用抽气机,而采用再普通不过的重力法。利用重力的作用使液体向下流出。在实验速度上,重力法远不如吸力法,但是在实验效果方面,重力法远比吸力法优胜,用吸力法只能得到谱带吸附,用重力法却能得到柱头吸附,在速度和效果两者的平衡中,我们还是倾向于优先保证好的效果。

2 溶剂填料方面,尽量少。

在固相萃取条件选择上,有人为了提高提取效率,尽量多加液体,或选择填料量大的小柱,我觉得大可不必如此。尤其在用重力法时,由于效率高,很多情况下是柱头吸附,并不是所有的填料都在起作用,填料多了不仅液体流出速度会更慢,而且在洗脱时的扩散会很明显。

因此建议,够用就行,在能保证效率时,填料尽量少,加液也不宜多。
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乐果
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3 实验条件不宜过分细化。

固相萃取从原理上是色谱分离,但是在操作时最好只把它作为吸附萃取剂使用,由于填料性质、松紧常有差异,因此在实际实验中不必因为追求效果的最佳化而设计出很复杂的洗脱程序。

在建立条件中,我们应该尽量多利用现成的资料,又快又简单建立起体系,同时要对操作过于复杂的步骤保持警惕性,在实验效果,实验速率和易操作性三者中取得平衡点。

4 最好只用一次

固相萃取柱最好只用一次。因为从严格的意义上来说,很多物质的吸附是不可逆的,一次吸附,无法洗脱,影响着下一次吸附,虽然有人做过重复利用的实验,但是总体来说为了节省一点经费而大大增加了结果的不可靠性和不确定性,是很不合算的行为。

因此建议,只用一次。如果想节省经费可以从减少填料量和使用小容积管入手,尽量用堆叠接头和延长管。
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小卢
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楼主总结的很全面啊!
对于重复使用,我感觉是不是应该一次性呢?
微雨燕双飞
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说说我的建议;
1 流速方面:尽量慢固然能得到较好的保留,但影响工作效率;当使用成品柱时,如果流速不超过5 ml/min时,保留不受影响;
2 溶剂和填料:如果只是上标品,那么极少的填料也能满足。当基质中杂质较多时,一些杂质会与目标物竞争吸附位点,此时会出现过载现象,所以较少的填料可能会出问题,本人以为确定填料量时还是得用基质加标进行验证;
3 建立方法:若对SPE和色谱法不太了解,建立方法前最好是咨询厂家,让厂家推荐合适的小柱和相关通用操作方法,然后自己进行优化,毕竟厂家对自己的产品最了解,厂家在分离方面的知识上更雄厚。参考文献也是必要的,但国内与SPE相关的文献价值较低,不参考也罢。国内期刊上SPE文献的问题:其一,不了解固定相,那么就不能从原理上对保留和洗脱进行正确估计,经常见到一些SPE的文献,实验者会选出多种性质迥异的小柱进行单因素实验,本人以为,当我们了解了目标物性质和基质性质后,很容易找出一款合适的小柱,进行小柱的单因素实验非常荒谬;其二,不能从原理上说明问题,得出一个好的结果就说“这样做很好”,“为什么好”则不明白,有很多是瞎碰的。
雾非雾
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说说我的建议;
1 流速方面:尽量慢固然能得到较好的保留,但影响工作效率;当使用成品柱时,如果流速不超过5 ml/min时,保留不受影响;
2 溶剂和填料:如果只是上标品,那么极少的填料也能满足。当基质中杂质较多时,一些杂质会与目标物竞争吸附位点,此时会出现过载现象,所以较少的填料可能会出问题,本人以为确定填料量时还是得用基质加标进行验证;
3 建立方法:若对SPE和色谱法不太了解,建立方法前最好是咨询厂家,让厂家推荐合适的小柱和相关通用操作方法,然后自己进行优化,毕竟厂家对自己的产品最了解,厂家在分离方面的知识上更雄厚。参考文献也是必要的,但国内与SPE相关的文献价值较低,不参考也罢。国内期刊上SPE文献的问题:其一,不了解固定相,那么就不能从原理上对保留和洗脱进行正确估计,经常见到一些SPE的文献,实验者会选出多种性质迥异的小柱进行单因素实验,本人以为,当我们了解了目标物性质和基质性质后,很容易找出一款合适的小柱,进行小柱的单因素实验非常荒谬;其二,不能从原理上说明问题,得出一个好的结果就说“这样做很好”,“为什么好”则不明白,有很多是瞎碰的。


大侠,SPE建立方法咨询厂家好像不太容易实现吧,因为很多都是从销售公司买的,国内的还可以打电话咨询相关厂家,那国外的咋办?
微雨燕双飞
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1 流速方面:尽量慢固然能得到较好的保留,但影响工作效率;当使用成品柱时,如果流速不超过5 ml/min时,保留不受影响;
2 溶剂和填料:如果只是上标品,那么极少的填料也能满足。当基质中杂质较多时,一些杂质会与目标物竞争吸附位点,此时会出现过载现象,所以较少的填料可能会出问题,本人以为确定填料量时还是得用基质加标进行验证;
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大侠,SPE建立方法咨询厂家好像不太容易实现吧,因为很多都是从销售公司买的,国内的还可以打电话咨询相关厂家,那国外的咋办?


直接打给这些公司在国内的分公司,联系技术支持,越过代理和销售。目前主流的分析仪器和耗材生产商在国内都有分公司吧。
雾非雾
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直接打给这些公司在国内的分公司,联系技术支持,越过代理和销售。目前主流的分析仪器和耗材生产商在国内都有分公司吧。


据在下接触到的,一般做销售的都没做过SPE应用,所以对方法开发知道的并不多,最多也就是给几篇相关资料,还是要使用者自己去摸索的。
快乐
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直接打给这些公司在国内的分公司,联系技术支持,越过代理和销售。目前主流的分析仪器和耗材生产商在国内都有分公司吧。


据在下接触到的,一般做销售的都没做过SPE应用,所以对方法开发知道的并不多,最多也就是给几篇相关资料,还是要使用者自己去摸索的。


同感,我们最喜欢应用工程师回访,能学到不少东东。
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