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主题：【求助】鱼体脂肪酸测定结果疑问

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zhangdp
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发表于：2010/08/24 16:33:32 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最近打算GCMS测定鱼体（淡水鱼和海鱼）肌肉中脂肪酸含量，前处理后上GCMS测定，结果与10来篇文献比较后，发现不管海鱼还是淡水鱼中DHA和EPA 的相对百分含量比文献低很多，分别都只有百分之零点几，而一般文献海鱼都有10％左右，而C16:0,C16:1;C18:0,C18:1占了绝大多数，总计估计有75％以上;不知道大家碰到过这种情况麽？是前处理方法，还是本身样品问题（样品是1年前冷冻干燥后粉碎－20度冰箱保存）？抑或就是这个结果？
前处理：脂类提取试了Bligh and dyer 方法和正己烷丙酮索氏抽提2种，2种方法结果差不多
      甲酯化采用2%的硫酸甲醇溶液酯化。
     
      具体如下：


一．脂肪提取（Bligh and dyer 方法，1959），索氏抽提方法就不写了。



1，玻璃试管内，30mg左右样品加3.75ml （氯仿：甲醇）（1：2），加内标c17酸，混合均匀（涡旋）

2，再加1.25 ml 氯仿，混合均匀（涡旋）

3，加1.25 ml 水，混合均匀（涡旋）

4，3000rpm离心10min，待 液体分层明显后

5，吸管伸入液体下层（有机相，氯仿层），吸取有机相，转移至新瓶中

6、提取液过无水硫酸钠，除水后，

7，氮吹近干，准备酯化



二、甲酯化

1， 加入0.1 ml 苯加0.5 ml 含2％硫酸的甲醇，水浴68度 2 h

2， 结束后，加入2 ml 水，混合均匀

3， 再用正己烷（）提取3次，合并3次提取液

4， 旋蒸，近干，
5， 转移至样品瓶，氮吹，近干

6， 加1ml异辛烷，待上机。

再上个实际样品图吧
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2010/8/24 18:28:32 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
会不会会保存时间久游关系？另外就是DHA和EPA 甲酯化彻底不彻底？
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2010/8/25 8:27:41 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 symmacros(jimzhu) 发表:
会不会会保存时间久游关系？另外就是DHA和EPA 甲酯化彻底不彻底？


混标是27种，为了完全分开，DHA只好拖到76min左右出来，EPA是54min左右。
DHA和EPA 甲酯化彻底不彻底－我也不好判断，但用的方法肯定是比较成熟的，只是不知道有没有哪个细节没注意到。另外加入c17酸，做了整个流程回收率为80％左右，但c17酸肯定游离态的。
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zhangdp
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2010/8/25 19:50:49 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是发错版面了麽?看帖子的都这么少啊
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tomdreams
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2010/8/26 9:15:54 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原因分析：

主要是甲酯化不充分，衍生问题，因为长链的脂肪酸甲酯化不如短链容易！

DHA和EPA都是多不饱和脂肪酸，很容易被氧化掉，衍生时要加入抗氧化剂！
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2010/8/26 9:45:49 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
嗯，抗氧化剂可能是个问题，一些文献里用了BHT，一部分文献里就没有。但我感觉差别有这么大麽。因为差别都是数量级上的。
我也去试试吧
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2010/8/26 13:09:05 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 tomdreams(tomdreams) 发表:
原因分析：

主要是甲酯化不充分，衍生问题，因为长链的脂肪酸甲酯化不如短链容易！--延长甲酯化时间还是温度？文献上大部分是70度+2小时

DHA和EPA都是多不饱和脂肪酸，很容易被氧化掉，衍生时要加入抗氧化剂！
－如果被氧化掉，EPA和dha生成什么？分别变成饱和的c20和c22？
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2010/8/26 13:17:54 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
也看到过衍生时，加入抗氧化剂和稳定剂（虽然不是有机酸甲酯化）。
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zhangdp
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2010/8/27 8:39:38 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
买到了化学纯的BHT，没有分析纯的，今天做样试试结果
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2010/9/3 14:51:29 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
顶下，仪器排队中，过断时间才知道
不知道会不会因为样品问题（放置时间太长？），如果这样，头要非常非常大了
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2010/9/3 14:57:52 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zhangdp(zhangdp) 发表:
顶下，仪器排队中，过断时间才知道
不知道会不会因为样品问题（放置时间太长？），如果这样，头要非常非常大了


你查查DHA和EPA在鱼肉中低温下的稳定性资料看看。如有可能测定一下新鲜的鱼看看数据如何。
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