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主题：【原创】对LC的认识(7)

浏览0 回复34 电梯直达
xue2009
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发表于：2010/10/09 14:33:10 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
  今天继续跟大家谈LC的认识；
    首先关于缓冲盐。我们一般用的也就是磷酸盐，甲酸盐，醋酸盐等等，就我而言，用甲酸盐和醋酸盐是比较多的，因为我一般做LC-MS，必须是可挥发性的盐。事实上磷酸盐在LC用的是比较多的，因为磷酸的紫外吸收小，使得背景干扰小；而且达到相同PH值所用的量少。关于使用缓冲盐的好处，大家都知道的是改善峰型，至于为什么能改善深究的人可能不多。这是因为缓冲盐离子会和硅羟基发生作用，也就是说会影响目标组分和硅羟基的作用，进而影响组分和固定相的作用，对改善峰型产生影响，再者缓冲盐离子的极性相比分子肯定大很多，这样也调节了流动相的极性，对出峰情况也造成影响，事实上缓冲盐能改善拖尾的道理也在于此，因为缓冲盐离子和硅羟基的预先作用使得次级保留的影响大大降低，进而改善了峰拖尾。
    其次谈一下怎么得到漂亮的峰型。当你在做LC时发现出峰异常时，首先一些最基本的应该考虑到：样品是否变质？浓度是否太大？进样量是否太大？梯度洗脱成程序是否合理？（关于程序怎么设置在前面的认识我已阐述，其实质也就是说：洗脱程序不合理使得灵敏度变得很差）溶剂的强度是否大于流动相强度？如果这些最基本的排除了，再考虑其他因素：是否是柱子脏了的原因？柱子是否塌陷？流动相及流动相的PH值是否合理？这些问题的解决在我前面的认识都详细谈到过，这时就不在累赘。关于怎么样再生柱子，我的方法是先用纯甲醇低流速冲洗，再用甲醇水梯度冲洗，再用异丙醇低流速冲洗，一般能得到比较好的效果，反冲是万不得已的方法。
    说来说去LC就这些部分，大家在平常的实验中按照这几点去做去想，一般是没有解决不了的问题的，因为实践过后的认识才是最深刻的，所以我的认识中尽量避免的理论的阐述，望大家指正。
该帖子作者被版主 月旭科技--小S加 8积分， 2经验，加分理由：感谢宝贵分享！
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2010/10/9 15:05:06 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
再生，反冲柱子时最好将检测器断开，以免检测池被污染。
该帖子作者被版主 samanthalas加 1积分， 2经验，加分理由：欢迎参与讨论！
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xue2009
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2010/10/9 15:24:30 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 dzh2188(jlf123) 发表:
再生，反冲柱子时最好将检测器断开，以免检测池被污染。

我在做实验时是把检测器断开的，因为异丙醇黏度毕竟比较大。但有人说也可以接上，正好把检测器的杂污染物冲洗走，所以这也就是这点我没提的原因，因为我也不能确定接不接检测器。
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samanthalas
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2010/10/9 16:48:13 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
xue的作品都到第7集了？
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老多_小多
emoc98311
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2010/10/9 17:42:37 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 samanthalas(samanthalas) 发表:
xue的作品都到第7集了？

是的，不过要批评他
这么好的东西应该以日记形式收入在一个帖子里，这样才方便交流，也有延续性
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头像更新中，请稍候…
kaikaifeng
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2010/10/9 19:23:13 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不错，呵呵~
很多情况我们用不到~
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快乐
ynsfeed
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2010/10/9 22:06:21 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
xue2009真是经验丰富，对异常峰分析得很到位，一般按此做，都能解决了。
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liuliuhui
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2010/10/9 23:23:12 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用纯甲醇冲多长时间呢？
用异丙醇冲色谱柱我们没试过，异丙醇的作用是什么呢？
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kaikaifeng
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2010/10/10 9:58:24 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 liuliuhui(liuliuhui) 发表:
用纯甲醇冲多长时间呢？
用异丙醇冲色谱柱我们没试过，异丙醇的作用是什么呢？

一般用于重生，不过我没有试过~
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liuliuhui
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2010/10/11 13:48:20 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 环烯醚萜(kaikaifeng) 发表:
原文由 liuliuhui(liuliuhui) 发表:
用纯甲醇冲多长时间呢？
用异丙醇冲色谱柱我们没试过，异丙醇的作用是什么呢？

一般用于重生，不过我没有试过~


用异丙醇再生收色谱柱保存在异丙醇中呢还是甲醇中呢？
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xue2009
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2010/10/11 14:06:20 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 liuliuhui(liuliuhui) 发表:
原文由 环烯醚萜(kaikaifeng) 发表:
原文由 liuliuhui(liuliuhui) 发表:
用纯甲醇冲多长时间呢？
用异丙醇冲色谱柱我们没试过，异丙醇的作用是什么呢？

一般用于重生，不过我没有试过~


用异丙醇再生收色谱柱保存在异丙醇中呢还是甲醇中呢？

保存到甲醇中就行
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