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主题：【求助】如何确定酶固定到毛细管柱上的问题

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wj36tc
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发表于：2010/10/28 22:50:17 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
在下新手，做的固定化酶的毛细管电色谱。做了好久都没有出现好的结果，用固定化酶修饰过的柱子和裸柱子比较在分析蛋白质的时候没什么差别。然后分析了一下，应该是酶还没有固定到毛细管内壁上，或者酶失活，或者其他什么原因。。。主要的是求助下如何确定在将酶固定化到内壁的每一个阶段，如何判定你所修饰的基团有没有结合到内壁？！
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2010/10/28 22:51:59 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
考虑了下测电渗流，可影响电渗的因素好多，可能不单单是结合基团的影响。。
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cpudaxiao
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2010/10/29 10:13:15 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wj36tc(wj36tc) 发表:
在下新手，做的固定化酶的毛细管电色谱。做了好久都没有出现好的结果，用固定化酶修饰过的柱子和裸柱子比较在分析蛋白质的时候没什么差别。然后分析了一下，应该是酶还没有固定到毛细管内壁上，或者酶失活，或者其他什么原因。。。主要的是求助下如何确定在将酶固定化到内壁的每一个阶段，如何判定你所修饰的基团有没有结合到内壁？！


看一下这个文献！！
附件：
研究简报 亲和毛细管电泳研究谷氨酸底物循环双酶反应.PDF
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2010/10/30 22:01:31 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
前后电渗流有变化么？先分析接上去的基团，会使电渗流增加还是减小！
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i_am_ling
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2010/10/30 22:15:48 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是不是可以通过测试反应物的浓度或是其他的间接来说明反应的情况呢？
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2010/11/2 15:01:33 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 sunpengwjh(sunpengwjh) 发表:
前后电渗流有变化么？先分析接上去的基团，会使电渗流增加还是减小！

有变小的，正在做着，结合上基团后电渗流变小。现在在找在体外测酶活的方法，因为有次直接用酶与蛋白质混合，直接用空柱子做还是没想要的峰，只是一单峰。郁闷。。。
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2010/11/2 15:02:49 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 i_am_ling(i_am_ling) 发表:
是不是可以通过测试反应物的浓度或是其他的间接来说明反应的情况呢？

我想这个比较难实现吧。。。
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sunpengwjh
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2010/11/9 16:20:38 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wj36tc(wj36tc) 发表:
原文由 i_am_ling(i_am_ling) 发表:
是不是可以通过测试反应物的浓度或是其他的间接来说明反应的情况呢？

我想这个比较难实现吧。。。

确实比较难实现，毕竟反应不是恰好完全反应，要有原来的物质保留在柱子内，很难判断是否还有某种物质！
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