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液相色谱（LC）
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主题：【求助】液相色谱多肽样品的制备

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yishengweiyao
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发表于：2010/10/29 22:40:24 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
各位大侠，小弟遇到一问题。我在分离多肽样品时，用的制备柱。发现样品在柱子里扩散很严重。纯度越来越低。恳求解决方法。我用的是c18反向，流动相是乙腈和纯水。
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2010/10/30 8:21:04 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
扩散很严重的结果是峰很宽吗，是不是流动相或流速不合理？
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xue2009
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2010/10/30 8:36:07 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是不是保留时间比较长导致的峰展宽？
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有水有渝
xky0230699
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2010/10/30 9:26:35 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xue2009(xue2009) 发表:
是不是保留时间比较长导致的峰展宽？


如果仅是峰展宽，没有与其它杂质峰有重合，应该也不会出现制备出来的物质纯度越来越低。
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21kgtan
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2010/11/1 7:54:10 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你可以通过分段收集，把目的峰分4、5段收，一般中间收到的都比较纯
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manunited
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2010/12/28 15:26:12 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你是不是样品溶解的时候，加过碱调节溶解度的，我以前做这个，遇到这样的情况
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tyys98
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2010/12/28 23:27:30 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 yishengweiyao(yishengweiyao) 发表:
各位大侠，小弟遇到一问题。我在分离多肽样品时，用的制备柱。发现样品在柱子里扩散很严重。纯度越来越低。恳求解决方法。我用的是c18反向，流动相是乙腈和纯水。

1）关注目标成分的分子量，太大的组分不宜用普通C18填料，要用大孔径的。
2）扩散的原因有多种，色谱柱效能很重要，不知你事先是否评价过。
3）制备分离的风格不同于分析，核心是数量！要通过提高数量求得纯度，这句话不知你能理解多少。
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fff75
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2010/12/29 13:40:54 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 yishengweiyao(yishengweiyao) 发表:
各位大侠，小弟遇到一问题。我在分离多肽样品时，用的制备柱。发现样品在柱子里扩散很严重。纯度越来越低。恳求解决方法。我用的是c18反向，流动相是乙腈和纯水。

1. 购买的柱子还是自己填的柱子，几英寸的？貌似你柱子的柱效低；
2. 你使用乙腈和纯水做流动相，不加缓冲吗？一般多肽的纯化都会加一定的缓冲盐；
3. 你的纯化条件够不够好？出峰是不是晚了？纯化不要太注重分离度，除非你要求纯度很高。
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〓猪哥哥〓
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2010/12/29 15:00:47 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
制备柱峰型不会很好看。是不是有样品残留在制备柱里面
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hujiangtao
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2010/12/30 8:00:24 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是不是柱子塌陷了
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yishengweiyao
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2011/1/3 12:15:29 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 tyys98(tyys98) 发表:
原文由 yishengweiyao(yishengweiyao) 发表:
各位大侠，小弟遇到一问题。我在分离多肽样品时，用的制备柱。发现样品在柱子里扩散很严重。纯度越来越低。恳求解决方法。我用的是c18反向，流动相是乙腈和纯水。

1）关注目标成分的分子量，太大的组分不宜用普通C18填料，要用大孔径的。
2）扩散的原因有多种，色谱柱效能很重要，不知你事先是否评价过。
3）制备分离的风格不同于分析，核心是数量！要通过提高数量求得纯度，这句话不知你能理解多少。

分子量在两千左右，用5%-65%保留时间在20分钟以内，溶解过滤后有点呈凝胶状。色谱柱是自己填的，柱效测过很好。
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