原文由 乐果(zxm-1980) 发表:
二、激光共聚焦扫描显微境
激光共聚焦扫描显微镜(laser confocal scanning microscope),用激光作扫描光源,逐点、逐行、逐面快速扫描成像,扫描的激光与荧光收集共用一个物镜,物镜扫描激光的聚焦点,也是瞬时成像的物点。由于激光束的波长较短,光束很细,所以共焦激光扫描显微镜有较高的分辨力,大约是普通光学显微镜的3倍。系统经一次调焦,扫描限制在样品的一个平面内。调焦深度不一样时,就可以获得样品不同深度层次的图像,这些图像信息都储于计算机内,通过计算机分析和模拟,就能显示细胞样品的立体结构。
为什么需要共聚焦显微镜?
1.光学显微镜经过了我们伟大的前人们的努力与改良,已经臻于完善的地步。事实上,通常的显微镜可以简单、快捷地为我们提供美丽的微观图像。但是,给这个近乎完善的显微镜世界带来革命性创新的事件发生了,这就是“激光扫描型共聚焦显微镜”的发明。这种新型显微镜的特点是:采用仅将焦点所集中的面上的图像情报提取出来的光学系统,通过改变焦点的同时将所获得的信息在图像存储器内复原,从而可以获得具有完全3维信息情报的鲜明的图像。通过这个方法,可以简单地获得以通常的显微镜所无法确认的、关于表面形状的信息。另外,对于通常的光学显微镜来说,“提高分辨率”与“加深焦点深度”是相互矛盾的条件,尤其在高倍率时这个矛盾更为突出,但在共聚焦显微镜来讲,这个难题迎刃而解。
原文由 乐果(zxm-1980) 发表:
9.表面形状测定机能
焦点移动机能上,追加以面的高度记录回路,就可以对样品的表面形状进行非接触式测定。以此机能为基础,对各画素中最大辉度值形成的Z轴坐标的记录成为可能,并以此情报为依据可以获得样品表面形状相关的情报。
10.高精度微小尺寸测定机能
受光单元采用了1维CCD成像传感器,因此可以不受扫描装置扫描倾斜等的影响,从而可以完成高精度的测定。另外,由于同时采用焦点深度可调(加深)的焦点移动记忆机能,从而可以剔除由于焦点偏移而造成的测定误差。
11.三维图像解析
使用表面形状测定机能,可以轻松地做出样品表面三维图像。不仅如此,还可以进行多种解析如:表面粗糙度测定、面积、体积、表面积、圆形度、半径、绝对最大长度、周长、重心、断层图像、FFT变换、线幅测定等等。
激光共聚焦扫描显微镜既可以用于观察细胞形态,也可以用于细胞内生化成分的定量分析、光密度统计以及细胞形态的测量。