主题：【分享】UV-2550型紫外可见分光光度计操作规程

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发表于：2011/01/08 21:34:05 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

UV-2550型紫外可见分光光度计操作规程

1开机预热

1.1先打开电脑显示器和主机，再打开仪器的电源，打开桌面上软件UVProbe2.21,单击[img=99,41]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image002.jpg[/img]，出现如下对话框（UV-2550PC Series-Rev.A(FD 00)）：

[img=505,268]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image004.jpg[/img]

仪器进入初始化状态。

1.2初始化大约需要5min，进行一系列的机械和光路的检查和初置，当所有项目初始化完毕后，单击OK。

1.3初始化完成后，需预热15min，即可往下操作。

2基线校正

2.1选择[img=94,27]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image006.jpg[/img]中的[img=29,23]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image008.jpg[/img]（photometric光度），打开光度模块。

2.2单击光度计键条中的[img=90,31]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image010.jpg[/img]（baseline基线），启动基线校正操作。

2.3当基线参数对话框（baseline Parameters）弹出时：

[img=320,97]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image012.jpg[/img]

在开始波长和结束波长中分别输入实验所需的波长范围内进行基线校正,点击OK。例如，在Start中输入700，在 End中输入300，点击OK，从700nm开始扫描。

2.4待扫描结束后，点击输出窗口Instrument History（仪器履历）标签。查看列出的基线校正信息。注意在基线校正过程中光度计状态窗口的读数变化，读数变化≤3nm可接受。当完成基线校正后，可进行以下操作。

3光度测定

3.1首先选择测定方式，在主菜单的[img=92,20]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image014.jpg[/img]所示的各键中，选择[img=26,25]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image016.jpg[/img]（photometric 光度）。

3.2 参数的设置（以硝酸盐为例说明）：

点击菜单栏中的[img=27,25]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image018.jpg[/img]键，出现图（photometric Method Wizard-[Wavelengths]：

[img=520,231]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image020.jpg[/img]

在wavelength(波长类型)中可供选择point（单点）和range（范围）,point表示测定单点波长； range表示测定波长范围。例如选择Point,在Wavelength(nm)（波长）中输入538，则Column Name出现WL538.0，点击add（添加）加入，点下一步，出现图（photometric Method Wizard-[Calibration]）：

[img=479,197]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image022.jpg[/img]

在Type（Multi Point,Single Point，K-Factor，Raw date）中选择MultiPoint，在Formula（Fixed wavelength，Ratio，Different）中选择Fixed Wavelength,WL1选择上一步添加过的波长，例如WL538.0为上面添加过的。Untis 为单位设定，可添加自己需要波长的单位。 Parameters中采用默认设置。

单击下一步；出现下图（标准表）：

一般选择默认状态，其中Sample选择表示重复测定的次数；Prompt before repetition表示在重复测定之前进行提示。

[img=481,195]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image024.jpg[/img]

再单击下一步；出现下图（样品表）：[img=470,191]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image026.jpg[/img]

和上面类似，用默认设置即可。再单击下一步，出现下图（Photometric metric Wizard-[File Properties]）：[img=520,266]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image028.jpg[/img]

在Filename中，有默认的文件路径和文件名，也可以自己命名，并储存在指定的文件夹下，单击完成。

3.3标准表设定

在Stand table 栏中单击右键，出现一个菜单，选择Properties,出现下图（Standard Table Properties）：

[img=420,138]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image030.jpg[/img]

设定Sample ID Name和Step Value,选择了Auto Fill后，就可进行自动填充。同理进行样品表的设置。

3.4标准曲线绘制

在样品室逐个放入标准，点击[img=94,32]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image032.jpg[/img]键即可。软件自动测定各标准溶液的吸光度，并自动绘制标准曲线。所配标准溶液的吸光度在0.15～1.0范围内，吸收测定的精密度约为0.5%（注：当摩尔吸收系数为10⁵L/mol.cm、石英皿的光程为1cm、浓度在1×10^-5～1.5×10^-6mol/L范围时，即可得到0.15～1.0范围的吸光度）。标准测定完毕，工作曲线自动显示。接下去测定未知样品的浓度。

3.7储存

测量完毕后，单击工具栏中的[img=30,26]file:///C:/DOCUME~1/user/LOCALS~1/Temp/msohtmlclip1/01/clip_image034.jpg[/img]（保存），储存到上图（Photometric metric Wizard-[File Properties]）指定的位置。

3.8关机

将比色皿从样品池中取出，先关闭软件UVProbe2.21，再关闭仪器电源开关。

4仪器维护

4.1 分光光度计实验室的室温保持在15～35℃，相对湿度宜控制在45%～80%。防尘、防震、防电磁干扰，仪器周围不应有强磁场。不要暴露在阳光直射的地方，不要放在有腐蚀性气体或在UV波长范围内有吸收的有机和无机气体的环境内。防止腐蚀性气体侵蚀，当测量具有挥发性样品溶液时，吸收池应加盖。

4.2如果开机后钨灯和氘灯不亮，应首先检查保险丝。若断了应更换新的3.15A的保险丝。注意更换保险丝时，关闭电源开关并切断电源。

4.3样品室的出射和入射石英窗不应有污染，不要用手触摸样品室中透光窗面，若不小心接触过，要用无水乙醇擦拭。假如在石英窗上发现有染色剂，应清洗干净以防影响测定。要小心保护比色皿的透光面，只能用镜头纸或脱脂棉轻轻擦拭，避免硬的物品把透光面划伤。至少每季度清洁样品室一次，擦洗样品室底部以清洗溅出的液体样品，防止其蒸发和腐蚀样品室，或由于腐蚀而得到错误结果。

5、期间核查

5.1期间核查的频率

正常情况下为两次检定之间，即每年进行一次，遇到有仪器设备维修、对仪器设备有怀疑或有特殊需要的情况下，应临时进行期间核查。

5.2外观检查

5.2.1样品室应密封良好，无漏光现象。干燥剂的位置摆放合理，无阻挡光路情况。

5.2.2吸收池的透光面应光洁，无划痕和斑点，任一面不得有裂纹。

5.2.3 仪器与计算机的接口处接触良好，光源工作正常，无灯丝熔断问题。

5.3波长准确度的校正

利用氘灯的两个特征波长峰486.0nm和656.1nm来检查波长的精确度。波长的漂移范围：±0.3nm。

5.4基线平直度

扫描200～1000nm的基线，吸光度的漂移范围：±0.001Abs以内。

5.5时间扫描

用动力学分光光度法在500nm扫描，漂移范围：±0.004Abs/h(电源启动2h后)。