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主题：【求助】SCX色谱进样后样品挂不上柱怎么回事？

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wmmsx
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发表于：2011/03/12 12:23:43 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
悬赏金额：20积分 状态： 未解决
以前做的都是反相HPLC，第一次用强阳离子交换，POLYLC的SCX柱，5um粒径，硅胶基质，100*4.6的柱子，流动相为：A：5mM乙酸钠+20%ACN+5mM高氯酸钠，乙酸调pH=3.7，B相：5mM乙酸钠+20%ACN+200mM高氯酸钠，乙酸调pH=3.7，梯度为100%A--30min--100%B。样品为人工合成九肽，等电点范围在6~9，样品进样后1.4min就被冲出，怀疑是ACN或盐浓度过高造成，于是把A相设定成100%水，B相为5mM乙酸钠+20%ACN+5mM高氯酸钠，乙酸调pH=3.7，梯度不变，调整后仍然如此。把流动相两相都用氨水调至pH=7.0，依然如此；把A相再设定成100%水，B相为5mM乙酸钠+20%ACN+5mM高氯酸钠，氨水调pH=7.0还是如故。实在分析不出不知道是什么原因，请离子交换经验丰富的板油给予指点迷津，谢谢！
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2011/3/12 13:45:05 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是不是溶剂过滤白头堵塞了，导致流动相比例发生了变化
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xue2009
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2011/3/13 21:54:37 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
PH值肯定要在强酸性条件下才行，让肽的N原子结合质子才能实现阳离子交换，你1点多分钟出的峰可能是溶剂峰。
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2011/3/14 9:36:51 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xue2009(xue2009) 发表:
PH值肯定要在强酸性条件下才行，让肽的N原子结合质子才能实现阳离子交换，你1点多分钟出的峰可能是溶剂峰。


我用的pH远在等电点以下啊，你指的强酸条件要到pH多少呢？1点多分钟出的峰不大可能是溶剂峰。因为在我调节的几种情况下这些峰的峰形很不一样，而且我也用强离子洗脱过，后面再没有洗脱峰出现。
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