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液相色谱（LC）
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主题：关于冲柱子的问题

浏览0 回复14 电梯直达
MandyCheng
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发表于：2006/02/18 22:38:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我是液相色谱的新手，问两个很简单而我确实不知怎么做的问题。
1.目前我用乙腈做流动相，如果我换流动相的话，比如乙酸铵-甲醇混合液，是开机排完气泡后直接调到所需流速做样，还是中间需要过渡一下？
2.关于冲柱子的问题。看到很多朋友说用了磷酸盐后最好不要用纯水冲柱子，用10％甲醇冲二三十分钟，逐渐过渡到纯甲醇溶液。但我记得工程师培训我们的时候说可以用纯水冲洗30min，然后直接用纯甲醇冲1-2h。对于C18柱来说，到底哪种方法更可取呢？
问题比较长，因为明天要做实验，现在实验室就一根柱子，所以只能询问的详细一点了，亟待大家的解答！谢谢！
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2006/2/18 23:22:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
尽量不要用纯水长时间冲柱子，最好加一点有机相。
  “可以”不代表长期使用没有问题。
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春雨
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2006/2/19 8:12:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 byron1111 发表:
尽量不要用纯水长时间冲柱子，最好加一点有机相。
  “可以”不代表长期使用没有问题。

说的对，不过我一般的加一点酸，
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妮飘
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2006/2/19 9:00:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
开机排完气后，最好是用你做实验的流动相先走至少半个小时，等仪器稳定后再进样比较好。
洗柱子时纯水不要冲太长时间，最多不要超过15分钟为好。然后再用100%的甲醇冲洗至少半个小时以上。
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shaweinan
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2006/2/19 11:53:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
　　将乙腈流动相换成乙酸铵-甲醇流动相中间最好过渡一下。此外在使用含有磷酸盐的流动相后，应该用含有少量有机相的水溶液长时间冲洗，冲洗时间至少半小时，因为磷酸盐在水中的溶解度很大，但在有机相中却很小，一旦在泵腔中析出就会损伤色谱泵的柱塞和柱塞密封，影响其使用寿命。
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Last edit by shaweinan
米老鼠
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2006/2/19 12:15:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
要用你的流动相再平衡一会，要20倍柱体积的量吧，通常要半个小时，等基线和压力都平了你才能做。
用磷酸盐后我觉最好拿纯水冲十分钟再用含甲醇的水冲，以免其在甲醇中析出。纯水冲10分钟对于柱子应该没有什么影响
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gongxh
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2006/2/19 20:47:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请问3楼"春雨":为什么要加一点酸?加哪种酸啊?
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liudy
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2006/2/19 20:52:00 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
开机排完气泡后,先用你的流动相平衡系统，待基线平稳，压力稳定后再开始作样。
用了磷酸盐后，先用纯水清洗片刻，然后逐渐过渡到100％甲醇。
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左货
hans chen
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2006/2/20 17:17:00 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

第一问题：要中间过渡，先按去除乙酸铵比例的甲醇水溶液冲，再按标准流速一半冲柱，最后按标准流速稳定
第二问题：最好不用纯水冲洗，同样用流动相比例的仅含水或者有机溶剂的溶液（不含盐、酸、离子对试剂等）冲冼，再过渡到纯溶剂冲洗。
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MandyCheng
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2006/2/21 9:57:00 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢大家的回答，关于HPLC维护的知识我还是需要大量的补充
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yiyiwang
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2006/3/15 23:46:00 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
以前曾提过用100%的超纯水来冲的！！但后来实验证实：不能用100%的水来冲！！最少要用含5%有机溶剂的超纯水来冲柱！！而我们室一般用10%的甲醇水
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