主题:【已应助】LC-MS检测四环素类抗生素峰型差,响应弱

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comeandgopjiu
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小弟用三重四级杆液质联用检测四环素类抗生素,结果发现TC、CTC、OTC的峰型都很差,就是峰太宽,峰高低,而且峰呈锯齿形,导致信噪比小,难以检测。同步检测的其他抗生素如磺胺类和大环内酯类是没有问题的。
样品用磷酸盐乙腈混合溶液提取,色谱条件是C18柱,A:0.1%甲酸水溶液,B:甲醇,梯度洗脱。请教做好这方面实验的兄弟姐妹们LC-MS检测四环素要注意什么?是否出现过上述情况?大家用的色谱质谱条件怎样的?
多谢。
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论坛版主招募|新窦
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峰形差要优化一下流动相,有试过有机相用乙腈吗?
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2011/8/17 9:07:37 Last edit by capinter
comeandgopjiu
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想过几种可能
换流动相,比如乙腈;
换C18,用C8替代;
流动相的甲酸浓度提高到0.5%。
不知道做过四环素检测的高手们,都用的是什么条件,让我可以减少摸索的时间,毕竟我们单位不让自己操作。
胜邪
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A:0.1%甲酸水溶液,B:0.1%甲酸乙腈,
C18,5cm,4um.
600-800ul/min.
尝试一下吧。

zl1982
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A: 0.3%甲酸水溶液  B: 0.3%甲酸乙腈,
C18,150*2.1mm,5um
happy爱米粒
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我们用的是甲醇和含0.1%甲酸的5mM乙酸铵,如果使用waters的T3柱,峰行会好一些,呵呵
inno12580
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原文由 xgy2005(xgy2005) 发表:
我们用的是甲醇和含0.1%甲酸的5mM乙酸铵,如果使用waters的T3柱,峰行会好一些,呵呵

请说一下梯度条件,参考一下,谢谢!
wuyuandaai
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原文由 inno12580(inno12580) 发表:
原文由 xgy2005(xgy2005) 发表:
我们用的是甲醇和含0.1%甲酸的5mM乙酸铵,如果使用waters的T3柱,峰行会好一些,呵呵

请说一下梯度条件,参考一下,谢谢!

梯度条件自己有话一下不是好了,别人的、也未必是适合你的!
qubin2000
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不同的C18柱,对四环素的峰形分离效果是不同的,要试不同厂家不同类型的柱子,不过总体来说,峰形不会很好,期望值不要太高
kylabs
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你试试这个条件和方法吧:

Method Conditions

ColumnCogent Bidentate C18™, 4µm, 100A
Catalog No.40018-75P
Dimensions4.6 x 75 mm
SolventsA: DI water + 0.1% formic acid
B: acetonitrile + 0.1% formic acid
Gradient
time (min.)%Btime (min.)%B
010680
430710
Post time3 min.
Flow rate1.0 mL/min.
SampleUSP grade tetracycline HCl capsule extract (degraded).
Stock Solution: 10.0 mg capsule contents were diluted with 10 mL 1.0 N HCl and sonicated for 10 min. 1 mL aliquot was diluted to 20 mL with DI water. Solution was heated at 80°C for 30 min. Solution was then diluted to 100 mL with DI water and filtered through a 0.45 µm nylon membrane HPLC filter (MicroSolv Technology Corp., Eatontown, NJ, USA).
Working Solution: Stock solution was diluted 10x using 0.01 N HCl diluent.
DetectionUV 360 nm (0? min) 430 nm (5? min)
菜头
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参考一下这篇文章吧,
高效液相色谱法测定猪肉中四环素类抗生素及其代谢产物
《中国卫生检验杂志》2010年 第5期
waters T3 柱,乙腈(2:3)-0.2%甲酸溶液为流动相
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