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主题：【讨论】猪肝检测前处理操作流程

浏览0 回复9 电梯直达
端慎木渐
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发表于：2006/02/24 11:22:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1、粉碎样品，取5g至锥型瓶内，加25ml 50mmol/L Hcl<配置方法：4.4-4.5ml 36%-38%盐酸定容至1000ml>，摇床振荡1.5h均质。——此时样品在2-8  可稳定3天。

2、称取6g均质物加入离心瓶中，10-15  4000rpm或更高转速离心15min。

3、转移上清液到另一个离心瓶中，加300  1mol/L NaOH<配置方法：110.0g NaOH +100ml去CO2水，室温从上述饱和溶液中取54ml上清液，去CO2水定容至500ml >，混合15min。

4、加入4ml 500mmol/L KH2PO4缓冲液（pH=3.0）<配置方法：30.02g KH2PO4去离子水定容至500ml，1mol/L H3PO4约20滴调节pH值，用pH计测量> 简单混合（轻摇），4  1.5h以上或过夜。——此时样品在2-8  可稳定2天，使用前离心。

5、10-15  4000rpm或更高转速离心15min，分离全部上清液（清亮为准），升温至20-24  ，准备RIDAC18 柱纯化。

6、以下至第  步需严格控制室温（20-24  ），3ml 甲醇（100%）洗柱，流速1d/s，<在固相萃取仪内操作，压力控制约在 -10KPa >。

7、2ml 50 mmol/L KH2PO4缓冲液（pH=3.0）<配置方法：50 ml 500mmol/L KH2PO4缓冲液去离子水定容至500ml , 1mol/L H3PO4 约10滴调节pH值，用pH计测量> 0.25d/s 洗柱。

8、样品（全部上清液）0.25d/s进柱。

9、2ml 50 mmol/L KH2PO4缓冲液（pH=3.0）0.25d/s洗柱。

10、1ml 甲醇（100%）洗柱，流速0.25d/s洗脱样品。

11、氮吹仪50-60  完全蒸发溶剂。

12、1 ml去离子水溶解干燥残留物，振荡2min，转移至指形管内备用（分析用20  ）。

以下进行试剂盒酶联免疫吸附实验操作，省略。
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端慎木渐
icetrob
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2006/2/24 11:24:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有不正确或是更方便简洁的处理步骤请大家不吝赐教！
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草莓
lmxzb
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2006/2/27 23:32:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个是用于检测什么的？是瘦肉精还是别的什么
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aoc99
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2006/2/28 8:23:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
德国Bio的瘦肉精检测方法。离心机离心速度可以再快一点，这样过柱迅速。
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端慎木渐
icetrob
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2006/3/3 9:55:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
做瘦肉精的，过柱的时间直接影响回收率么？我做的回收率偏低（50%多一点），大家有没有什么好的建议
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qjyjgu
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2006/3/3 14:36:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果是做克仑特罗的话。北京望尔生物的一种简单的前处理方法回收可到75%+ -10%.要的话给我发邮件吧。我以附件发给你。qjyjgu@163.com
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japor
Japor
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2006/3/3 16:06:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
黑糊糊黑糊糊合乎
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bioexcellent
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2007/1/31 14:07:00 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
为了回收率，过柱一定要缓慢，望尔这种回收60%出头的怎么行？毕竟是试剂盒，回收这么低假阴性率会比胶体金还高呢！
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2007/2/2 17:17:00 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
实践证明：用冷冻离心机离心去脂肪是提高回收率的关键之一！
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sfwq
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2007/2/3 16:48:00 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
太复杂了
不好用
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