主题:【讨论】猪肝检测前处理操作流程

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端慎木渐
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1、粉碎样品,取5g至锥型瓶内,加25ml 50mmol/L Hcl<配置方法:4.4-4.5ml 36%-38%盐酸定容至1000ml>,摇床振荡1.5h均质。——此时样品在2-8  可稳定3天。

2、称取6g均质物加入离心瓶中,10-15  4000rpm或更高转速离心15min。

3、转移上清液到另一个离心瓶中,加300  1mol/L NaOH<配置方法:110.0g NaOH +100ml去CO2水,室温从上述饱和溶液中取54ml上清液,去CO2水定容至500ml >,混合15min。

4、加入4ml 500mmol/L KH2PO4缓冲液(pH=3.0)<配置方法:30.02g KH2PO4去离子水定容至500ml,1mol/L H3PO4约20滴调节pH值,用pH计测量> 简单混合(轻摇),4  1.5h以上或过夜。——此时样品在2-8  可稳定2天,使用前离心。

5、10-15  4000rpm或更高转速离心15min,分离全部上清液(清亮为准),升温至20-24  ,准备RIDAC18 柱纯化。

6、以下至第  步需严格控制室温(20-24  ),3ml 甲醇(100%)洗柱,流速1d/s,<在固相萃取仪内操作,压力控制约在 -10KPa >。

7、2ml 50 mmol/L KH2PO4缓冲液(pH=3.0)<配置方法:50 ml 500mmol/L KH2PO4缓冲液去离子水定容至500ml , 1mol/L H3PO4 约10滴调节pH值,用pH计测量> 0.25d/s 洗柱。

8、样品(全部上清液)0.25d/s进柱。

9、2ml 50 mmol/L KH2PO4缓冲液(pH=3.0)0.25d/s洗柱。

10、1ml 甲醇(100%)洗柱,流速0.25d/s洗脱样品。

11、氮吹仪50-60  完全蒸发溶剂。

12、1 ml去离子水溶解干燥残留物,振荡2min,转移至指形管内备用(分析用20  )。

以下进行试剂盒酶联免疫吸附实验操作,省略。
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端慎木渐
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有不正确或是更方便简洁的处理步骤请大家不吝赐教!
草莓
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aoc99
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德国Bio的瘦肉精检测方法。离心机离心速度可以再快一点,这样过柱迅速。
端慎木渐
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做瘦肉精的,过柱的时间直接影响回收率么?我做的回收率偏低(50%多一点),大家有没有什么好的建议
qjyjgu
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如果是做克仑特罗的话。北京望尔生物的一种简单的前处理方法回收可到75%+ -10%.要的话给我发邮件吧。我以附件发给你。qjyjgu@163.com
japor
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为了回收率,过柱一定要缓慢,望尔这种回收60%出头的怎么行?毕竟是试剂盒,回收这么低假阴性率会比胶体金还高呢!
bioexcellent
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实践证明:用冷冻离心机离心去脂肪是提高回收率的关键之一!
sfwq
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