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液相色谱（LC）

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主题：【求助】菲罗门色谱柱柱压问题请教！

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yiyaoyy

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发表于：2011/08/31 15:58:26 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

本人是液相新手，最近用了一个phenomenex Hydro-RP的色谱柱，规格是150*4.6*4.
因为项目很着急，所以仓促之间定的色谱条件有点苛刻，最后用的是25%的乙腈，2.0ml/min 的流速，液相色谱仪是Waters。刚开始用的时候。压力是2400左右，每次使用的流动相都用0.22微米的膜过滤，因为是原料药，所以样品没有过滤。用完都用50%的乙腈冲洗半小时。再用100%的乙腈冲洗1小时，但是用了几天后发现压力逐步上升。使用过程中压力很稳定，但下次再使用时就发现压力上升个100~200的样子（每次用都这样上升，现在已经是3400了，仪器的压力上限是4000，所以现在又点寝食难安的感觉！！！）。感觉是色谱柱被杂质堵塞了，所以用10%~100%的乙腈梯度洗脱4小时，压力始终没有下降。后来用异丙醇0.2的流速冲洗2小时后，换100%的乙腈0.5流速冲洗4小时，压力依然没有下降。不知道是不是色谱柱在较大的压力下塌陷了，但是前后做出来的色谱图比较，理论板数和分离度以及出峰时间都没有什么大的改变！本人新手，望指点！

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2011/8/31 16:26:49 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

参考一下http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20090831/2088286/
个人建议如果是柱压上升太快，就把柱子反向0.2-0.5的低流速异丙醇冲试试

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yiyaoyy

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2011/8/31 16:45:27 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

感谢您的回复，我的这根色谱柱的这种情况，主要原因是堵塞吗？冲洗修复的几率有多大？

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2011/8/31 16:52:30 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

使用异丙醇冲洗之前和之后要用什么样的溶剂来置换呢？我之前使用完毕后，柱子保存在纯乙腈中，因为今天要用，所以昨天晚上用异丙醇0.2的流速正向冲洗了1.5小时，后用100%乙腈0.5流速冲洗了4小时，可是今天使用的时候，发现压力升到了3400，（上次使用的时候是3100左右），不知道使用异丙醇的时候要用什么样的梯度，是不是我的操作有疏忽？但是看很多资料都是这么说的，使用完异丙醇后，用纯乙腈冲洗就可以了，而且今天使用的时候，发现我的图谱基线很不稳，进样之前很好，开始走样品后就不行了，噪音很大，不知道是什么原因。我今天的样品还是用0.45的膜过滤了的！！

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2011/9/1 8:58:22 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

确定是色谱柱产生的压力吗？

卸下色谱柱，看系统压力，如果系统压力比较高，那就有可能是在线过滤器的原因

如果是色谱柱堵了，反冲确实有效果，但是并不是所有的柱子都能反冲，建议你先问一下厂家工程师

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2011/9/2 11:07:00 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

菲罗门的柱子工程师说可以反冲，我用的小流速反冲的，柱子的分离度和塔板数没有下降！塔板数还在10500左右，跟原来一样。确定是柱子的问题，不是系统的问题。
之前原料药确实是没有过膜，就是用纯乙腈溶，然后超纯水稀释至刻度，就直接进样了。如果是柱子被样品堵塞了，有什么好的解决方法吗？我昨晚用75%的乙腈小流速反冲了一晚上，柱压没有丝毫的改变！之前10%~100%乙腈梯度洗脱也用过了，也没有效果！
所有应该注意的地方都注意了，但是我们这里原料药大家都是不过膜直接用，从来没有出现这种情况，所以我一直没有对样品过滤，我现在也担心是样品里面有杂质，或者溶解性不是特别好，有少量析出，梯度洗脱、异丙醇小流速冲洗、小流速反冲等常规方法都用过了，都没有起色，我正在考虑是不是要把柱头卸下来超声，不知道有没有哪位大侠有更好的方法！先在此谢过了！

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