1.仪器

1.1紫外分光光度计（TU-1810型）；配石英吸收池（1cm）4个

1.2容量瓶（50mL）：10个；容量瓶（100mL）1个

1.3吸量管（1、2、5、10mL）：各1支

1.4移液管（15、20、25mL）：各1支

2.试剂

2.1标准储备液溶液：水杨酸、邻二氮菲、苯酚、三氯苯酚分别配成0.100 mg/mL的标准溶液。

2.3标准工作溶液：其中待测组分浓度为1mg/mL。

2.2未知液：其中含有给出的四种物质中的两种。

3.实验操作

3.1吸收池配套性检查

石英吸收池装蒸馏水，以一只吸收池为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余吸收池的透射比，其偏差应不大于0.5%，可配成一套使用。

3.2未知物的定性分析

现场提供被测组分和干扰组分的吸收曲线的标准谱图。

选手将四种标准储备溶液均稀释成10.0ug/mL的试液。以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内扫描四种溶液，绘制吸收曲线，根据所得到的吸收曲线对照标准谱图，确定被测组分和干扰组分的名称。

3.3确定测定主波长和基线波长

在已知被测组分和干扰组分的名称后，用前面配制的四种溶液中相应的溶液，确定测定主波长和基线波长。

3.4 采用双波长等吸收点法测定未知液含量（什么叫双波长等吸收点法，怎么做我不懂）

3.4.1预测定

分别吸取1.00mL标准工作溶液和未知液定容为50mL，在主波长和基线波长下测定吸光度，由差值吸光度确定正式测定时候应该吸取的未知液和标准溶液体积。(怎么选主波长和基线波长)

3.4.2配制标准系列溶液

吸取一定体积（由预实验确定）标准工作溶液定容为100mL，再分别准确移取1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL上述溶液，在50mL容量瓶中定容。

3.4.3配制未知溶液

选手自定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液，平行3份。

3.4.4吸光度测定

采用“双波长法”测定标准系列溶液和未知溶液的吸光度，由工作站直接读出未知溶液的浓度。

4、结果计算

根据未知液的稀释倍数，可求出原始样品溶液的浓度。

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2011/9/15 8:22:55 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

推荐方法

1. 维生素C含量的测定：准确吸取1mg/mL的维生素C标准储备液10mL，在100mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100ug/mL）。再分别准确移取0、1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在50mL容量瓶中定容（浓度分别为0、2、4、8、12、16、20ug/mL）。准确移取10mL维生素C未知液，在50mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。从标准曲线上查得未知液的浓度。

2. 苯甲酸含量的测定：准确吸取1mg/mL的苯甲酸标准储备液10mL，在100mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100ug/mL）。再分别准确移取0、1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为0、1、2、4、6、8、10ug/mL）。准确移取10mL苯甲酸未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。从标准曲线上查得未知液的浓度。

3. 糖精钠含量的测定：准确吸取1mg/mL的糖精钠标准储备液10mL，在100mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100ug/mL）。再分别准确移取0、1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在50mL容量瓶中定容（浓度分别为0、2、4、8、12、16、20ug/mL）。准确移取10mL糖精钠未知液，在50mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。从标准曲线上查得未知液的浓度。

4. 水杨酸含量的测定：准确吸取1mg/mL的水杨酸标准储备液10mL，在100mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为100ug/mL）。再分别准确移取0、1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在50mL容量瓶中定容（浓度分别为0、2、4、8、12、16、20ug/mL）。准确移取10mL水杨酸未知液，在50mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。然后以浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制标准曲线。从标准曲线上查得未知液的浓度。

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2011/9/15 8:24:01 Last edit by wccd

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2011/9/15 9:44:16 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

发到这个板块不合适吧，有专门的紫外板块啊，里面的tutm老师很有名的，你可以问问他

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2011/9/15 12:03:38 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 happyalife(happyalife) 发表:
发到这个板块不合适吧，有专门的紫外板块啊，里面的tutm老师很有名的，你可以问问他

谢谢推荐！其实这个我也没做过，建议可以参考一下 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110612/3359287/

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2011/9/15 12:45:00 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110820/3475686/
我的这个帖子里面有一个关于双波长法的图示，可能会好理解一些。

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2011/9/15 16:50:06 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 mengzhaocheng(mengzhaocheng) 发表:
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110820/3475686/
我的这个帖子里面有一个关于双波长法的图示，可能会好理解一些。

哦，你写的那个双波长法是用联立方程组计算两个组分的浓度，与楼主的双波长等吸收点法好像是有差异的，记得我与你在站短中提起过的。

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2011/9/16 15:52:18 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

不懂不懂。。怎没人做过呢急啊？？？

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2011/9/19 16:52:35 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

楼主，给你个文章，看附件。

你的基线波长就是里面提到的参比波长。

这个问题，在你得“那位来说说紫外分光光度计等吸收点法？本人刚接触不懂”已经解答的很详细了吧。
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110612/3359287/

就是本帖子，大家的回复，好好看看也差不多吧。

如果再不懂，还是问问zlhuang0132老师吧。

附件：

双波长差吸光度法及后分光技术的应用和发展前景.pdf

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