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主题：【原创】【极限体验】RP-HPLC保留时间和TLC之Rf值比较(11月份)

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发表于：2011/11/27 21:25:05 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被samanthalas设置为精华；
【发贴背景】
由冰雨开贴讨论的出峰顺序问题
链接：http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111125/3668165/
我选了两个典型的化合物，下面要对它们的TLC行为和HPLC行为进行比较。

【化合物结构】
这两个化合物在以前的体验贴中，曾多次亮相，呵呵。
第一个是环烯醚萜类化合物（就叫X吧）。

一个是西红花苷类化合物（就叫Y吧）。

【仪器试剂】
水：重蒸水
甲醇：色谱纯，天津大茂       
HPLC：SHIMADZU LC-10AT、SHIMADZU SPD-10A

【色谱条件】 
色谱柱：Ultimate XB-C18柱（5μm, 4.6x250mm）
流动相：甲醇/水（V：V），梯度洗脱
起始浓度：30%；梯度：30min--60%
流速：1.0ml/min
柱温：柱温箱25度

【TLC比较】
首先进行TLC比较，展开剂为氯仿/甲醇/乙酸＝2：1：0.01
实验结果表明：化合物X的Rf较大，化合物Y的Rf值较小
传统意义上，可以理解成：相对于化合物Y，化合物X的极性较小


【HPLC比较】
理论上来说，应该是化合物X的出峰时间比化合物Y的出峰时间晚
可以实际的结果是，化合物X的出峰时候比化合物Y的出峰时间早很多
第一张为化合物X的HPLC色谱行为图，保留时间12min
注：10多分钟就出峰了，实在没心情继续再白跑几十分钟了，就停止采集了


这是化合物Y的HPLC色谱行为图，保留时间34min


【小结与讨论】
1. 不能简单地依据TLC的Rf值或者HPLC的保留时间来判断化合物的极性大小，相反，依据化合物的极性大小来推测TLC的Rf值或者HPLC的保留时间，有时候也行不通，比如文中提到的两个化合物。实际经验告诉我们，TLC的Rf值或者HPLC的保留时间，这二者没有必然的联系，仅作参考。

2. 类似的情况很多，比如有些样品，在用正相（TLC）或者用HPLC的时候，都表现出很强的死吸附。为什么？其实很简单，TLC和HPLC这个过程很复杂（说复杂就意味着，你不要细问，因为具体的我也说不上来），涉及很多其它作用力，是一种综合作用的结果

3. 大家慢慢讨论吧，很多师弟师妹问我这个问题，我从来都是说：Rf值跟保留时间的关系，不是绝对的，仅供参考。
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kaikaifeng
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2011/11/27 21:25:19 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼层备用。
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kaikaifeng
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2011/11/27 21:26:39 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
下篇体验：同一样品，在不同色谱柱上保留时间的比较
好像这个已经发过体验了还是？汗。。
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冷冷的冰雨
xy4585618
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2011/11/27 22:59:03 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
赞同kiakia的观点
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2011/11/27 23:02:00 Last edit by xy4585618
dahua1981
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2011/11/28 8:55:42 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这篇文章的灵感kaikai还是受冰雨的启发啊
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fengmo4668
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2011/11/28 9:22:47 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 dahua1981(dahua1981) 发表:
这篇文章的灵感kaikai还是受冰雨的启发啊


也就是说，大闸蟹或者礼品应该分冰雨一半？？
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fengmo4668
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2011/11/28 9:25:21 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
另外，窃以为，kaikai的TLC所用展开剂和液相所用流动相相差太远（配比和种类），不具有可比较性。
如风、马、牛者。
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2011/11/28 11:15:53 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 dahua1981(dahua1981) 发表:
这篇文章的灵感kaikai还是受冰雨的启发啊


NO，以前就想发的，觉得太简单
冰雨的贴子，算导火索
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2011/11/28 11:16:35 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 fengmo4668(fengmo4668) 发表:
原文由 dahua1981(dahua1981) 发表:
这篇文章的灵感kaikai还是受冰雨的启发啊


也就是说，大闸蟹或者礼品应该分冰雨一半？？


现在大闸蟹成通用货币了啊？
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2011/11/28 11:18:01 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 fengmo4668(fengmo4668) 发表:
另外，窃以为，kaikai的TLC所用展开剂和液相所用流动相相差太远（配比和种类），不具有可比较性。
如风、马、牛者。


因为TLC跟HPLC本身这二者就没有必然的联系
我贴子也是这么表达的，所以，风马牛不相及只是另一种诠释
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fengmo4668
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2011/11/28 11:41:13 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 头像更新中，请稍候…(kaikaifeng) 发表:
原文由 fengmo4668(fengmo4668) 发表:
原文由 dahua1981(dahua1981) 发表:
这篇文章的灵感kaikai还是受冰雨的启发啊


也就是说，大闸蟹或者礼品应该分冰雨一半？？


现在大闸蟹成通用货币了啊？


关键是极限体验会送大闸蟹的嘛。
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手机版： 【极限体验】RP-HPLC保留时间和TLC之Rf值比较(11月份)
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