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扫描电镜（SEM/EDS）

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主题：【求助】电镜扫描物质分析问题，不是很明白。

浏览0 回复2 电梯直达

jianfkunzhong

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发表于：2011/12/13 15:27:10 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

微生物样品处理
第一做电镜扫描，处理四膜虫的样品，没有临界点干燥仪，只有冷冻干燥仪。准备用叔丁醇，然后进行冷冻干燥，不知是不是可行，一般冷冻干燥需多长时间？还有制好样品后需要马上就进行镀膜、电镜吗，还是可以放一放？？？有点着急啊，希望能尽快得到大家的帮助、、谢啦

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2011/12/19 21:16:43 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

没做过，冷冻干燥仪没有说明所需要的干燥时间吗

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2011/12/19 21:21:36 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

百度来的：

　化学方法制备样品　其程序通常是：清洗→化学固定→干燥→喷镀金属。

　　清洗　某些生物材料表面常附血液、细胞碎片、消化道内的食物残渣、细菌、淋巴液及粘液等异物，掩盖着欲观察的部位，因而，需要在固定之前用生理盐水或等渗缓冲液等把附着物清洗干净。亦可用 5%碳酸钠冲洗或酶消化法去除这些异物。

　　固定　通常采用醛类(主要是戊二醛和多聚甲醛)与四氧化锇双固定，也可用四氧化锇单固定。四氧化锇固定不仅可良好地保存组织细胞结构，而且能增加材料的导电性和二次电子产额，提高扫描电子显微图像的质量。这对高分辨扫描电子显微术是极端重要的。为增强这种效果，可用四氧化锇-单宁酸或是四氧化锇-珠叉二胼等反复处理材料，使其结合更多的重金属锇，这就是导电染色。

　　干燥　固定后通常采用临界点干燥法。其原理是：适当选择温度和压力，使液体达到临界状态(液态和气相间界面消失)，从而避免在干燥过程中由水的表面张力所造成的样品变形。对含水生物材料直接进行临界点干燥时，水的临界温度和压力不能过高(37.4℃，218帕)。通常用乙醇或丙酮等使材料脱水，再用一种中间介质，如醋酸戊酯，置换脱水剂，然后在临界点干燥器中用液体或固体二氧化碳、氟利昂 13以及N2O等置换剂置换中间介质，进行临界干燥。

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