如何选择、使用、维护液相色谱柱？

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2012/1/9 23:21:46 11楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

三．色谱柱的维护

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2012/1/9 23:22:04 12楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1. 色谱柱的平衡　　
反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。新柱应先使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！
操作步骤：　　
a. 平衡开始时将流速缓慢地提高，用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂流速如果较低，则需要较长的时间来平衡)　　
b. 如果使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡；分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。

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2012/1/9 23:22:44 Last edit by dyann

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2012/1/9 23:22:59 13楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

2．色谱柱的再生　　
长期使用的色谱柱，往往柱效会下降(柱子的理论塔板数减低)。可以对色谱柱进行再生，在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。　　　　
建议用来冲洗柱子的溶剂体积：　

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2012/1/9 23:23:38 14楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

2．色谱柱的再生　　
长期使用的色谱柱，往往柱效会下降(柱子的理论塔板数减低)。可以对色谱柱进行再生，在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。　　　　
建议用来冲洗柱子的溶剂体积：　

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2012/1/9 23:24:09 15楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积　　
125-4mm 　 1.6mL 　 30mL　　
250-4 mm 　 3.2mL 　 60mL　　
250-10mm 　 20mL 　 400mL 　　
选择再生方法：　　极性固定相(如Si，NH2* ，DIOL基色谱填料)的再生：　　正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**　　非极性固定相(如反相色谱填料RP－18，RP－8，CN等)的再生：　　水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→水

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2012/1/9 23:24:42 16楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

注意：　　
a. 在对-NH2改性的色谱柱进行再生时，由于-NH2可能以铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1mol/L的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。　　
b. 0.05mol/L稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱，如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，在水洗后加用0.05mol/L稀硫酸冲洗非常有效。

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