主题：【求助】请问用微量流通池会造成信号损失吗

原文由 peterhello(peterhello) 发表:

原文由 pandora98(pandora98) 发表:
实际上这个问题我仔细研究过的，因为我也曾经换过小体积的流通池，结果就是峰面积变小了。
拆开流通池你就会发现，样品吸收紫外光能量时，其流动方向是与光路平行的，而不是想象当中的垂直。
换小体积的流通池，必然是这段平行距离的缩短，样品流经流通池的时间缩短，直接导致单位样品（与样品浓度和体积无关）与紫外光接触的时间减少，另外管路内径变小也会导致相同流速下样品流经流通池的速度变快，与紫外光接触的时间减少，所以峰面积一定变小。
反过来，其它所有条件都不变的情况下，流速减慢一半，样品峰面积会相应增加一倍

原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:

原文由 pandora98(pandora98) 发表:
流通池变小，会导致光路变小，光程变短，紫外光被样品吸收的能量减少，导致相同条件下，小流通池比大流通池对同一浓度样品的吸收峰面积变小。

我只是从理论想象上去理解，其实楼主去实践一次不就行了吗，更换一下检测池也很简单。

“小流通池比大流通池对同一浓度样品的吸收峰面积变小”
这个我不是很赞同，因为换小径柱，填料粒径应该也是小的吧，还有小体积检测池，那管路也要更换成小内径的才能匹配，相同的进样量组分通过检测池的时间是不是也会延长呢，是不是会增加峰宽，这样综合一下，峰面积一定是变小的吗？

做类似UPLC的方式时换小体积流通池主要是为了减小峰展宽,保持尖锐的峰型,峰面积变小不会是大问题的,信噪比肯定是提高的.而常规液相则完全没有必要使用小流通池

原文由 pandora98(pandora98) 发表:

原文由 peterhello(peterhello) 发表:

原文由 pandora98(pandora98) 发表:
实际上这个问题我仔细研究过的，因为我也曾经换过小体积的流通池，结果就是峰面积变小了。
拆开流通池你就会发现，样品吸收紫外光能量时，其流动方向是与光路平行的，而不是想象当中的垂直。
换小体积的流通池，必然是这段平行距离的缩短，样品流经流通池的时间缩短，直接导致单位样品（与样品浓度和体积无关）与紫外光接触的时间减少，另外管路内径变小也会导致相同流速下样品流经流通池的速度变快，与紫外光接触的时间减少，所以峰面积一定变小。
反过来，其它所有条件都不变的情况下，流速减慢一半，样品峰面积会相应增加一倍

原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:

原文由 pandora98(pandora98) 发表:
流通池变小，会导致光路变小，光程变短，紫外光被样品吸收的能量减少，导致相同条件下，小流通池比大流通池对同一浓度样品的吸收峰面积变小。

我只是从理论想象上去理解，其实楼主去实践一次不就行了吗，更换一下检测池也很简单。

“小流通池比大流通池对同一浓度样品的吸收峰面积变小”
这个我不是很赞同，因为换小径柱，填料粒径应该也是小的吧，还有小体积检测池，那管路也要更换成小内径的才能匹配，相同的进样量组分通过检测池的时间是不是也会延长呢，是不是会增加峰宽，这样综合一下，峰面积一定是变小的吗？

做类似UPLC的方式时换小体积流通池主要是为了减小峰展宽,保持尖锐的峰型,峰面积变小不会是大问题的,信噪比肯定是提高的.而常规液相则完全没有必要使用小流通池

减小峰展宽就是通过缩短样品与紫外光接触的时间来实现的，在色谱柱、流动相、梯度、流速等完全相同的条件下，uplc比普通hplc分离度要好，我曾经遇到过用uplc使用普通150mm，3.5um色谱柱开发的分析方法，在普通hplc上分离度明显下降不达标的问题。色谱峰面积变小只是一个副作用。

原文由 peterhello(peterhello) 发表:

原文由 pandora98(pandora98) 发表:

原文由 peterhello(peterhello) 发表:

原文由 pandora98(pandora98) 发表:
实际上这个问题我仔细研究过的，因为我也曾经换过小体积的流通池，结果就是峰面积变小了。
拆开流通池你就会发现，样品吸收紫外光能量时，其流动方向是与光路平行的，而不是想象当中的垂直。
换小体积的流通池，必然是这段平行距离的缩短，样品流经流通池的时间缩短，直接导致单位样品（与样品浓度和体积无关）与紫外光接触的时间减少，另外管路内径变小也会导致相同流速下样品流经流通池的速度变快，与紫外光接触的时间减少，所以峰面积一定变小。
反过来，其它所有条件都不变的情况下，流速减慢一半，样品峰面积会相应增加一倍

原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:

原文由 pandora98(pandora98) 发表:
流通池变小，会导致光路变小，光程变短，紫外光被样品吸收的能量减少，导致相同条件下，小流通池比大流通池对同一浓度样品的吸收峰面积变小。

我只是从理论想象上去理解，其实楼主去实践一次不就行了吗，更换一下检测池也很简单。

“小流通池比大流通池对同一浓度样品的吸收峰面积变小”
这个我不是很赞同，因为换小径柱，填料粒径应该也是小的吧，还有小体积检测池，那管路也要更换成小内径的才能匹配，相同的进样量组分通过检测池的时间是不是也会延长呢，是不是会增加峰宽，这样综合一下，峰面积一定是变小的吗？

做类似UPLC的方式时换小体积流通池主要是为了减小峰展宽,保持尖锐的峰型,峰面积变小不会是大问题的,信噪比肯定是提高的.而常规液相则完全没有必要使用小流通池

减小峰展宽就是通过缩短样品与紫外光接触的时间来实现的，在色谱柱、流动相、梯度、流速等完全相同的条件下，uplc比普通hplc分离度要好，我曾经遇到过用uplc使用普通150mm，3.5um色谱柱开发的分析方法，在普通hplc上分离度明显下降不达标的问题。色谱峰面积变小只是一个副作用。

峰展宽和检测器没关系,是样品区带展宽,不检测一样展宽.有了检测是只是能显示出这个展宽,不能改变本质.关键还是要减小系统体积,使用小粒径柱子高流速

原文由 pandora98(pandora98) 发表:

原文由 peterhello(peterhello) 发表:

原文由 pandora98(pandora98) 发表:

原文由 peterhello(peterhello) 发表:

原文由 pandora98(pandora98) 发表:
实际上这个问题我仔细研究过的，因为我也曾经换过小体积的流通池，结果就是峰面积变小了。
拆开流通池你就会发现，样品吸收紫外光能量时，其流动方向是与光路平行的，而不是想象当中的垂直。
换小体积的流通池，必然是这段平行距离的缩短，样品流经流通池的时间缩短，直接导致单位样品（与样品浓度和体积无关）与紫外光接触的时间减少，另外管路内径变小也会导致相同流速下样品流经流通池的速度变快，与紫外光接触的时间减少，所以峰面积一定变小。
反过来，其它所有条件都不变的情况下，流速减慢一半，样品峰面积会相应增加一倍

原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:

原文由 pandora98(pandora98) 发表:
流通池变小，会导致光路变小，光程变短，紫外光被样品吸收的能量减少，导致相同条件下，小流通池比大流通池对同一浓度样品的吸收峰面积变小。

我只是从理论想象上去理解，其实楼主去实践一次不就行了吗，更换一下检测池也很简单。

“小流通池比大流通池对同一浓度样品的吸收峰面积变小”
这个我不是很赞同，因为换小径柱，填料粒径应该也是小的吧，还有小体积检测池，那管路也要更换成小内径的才能匹配，相同的进样量组分通过检测池的时间是不是也会延长呢，是不是会增加峰宽，这样综合一下，峰面积一定是变小的吗？

做类似UPLC的方式时换小体积流通池主要是为了减小峰展宽,保持尖锐的峰型,峰面积变小不会是大问题的,信噪比肯定是提高的.而常规液相则完全没有必要使用小流通池

减小峰展宽就是通过缩短样品与紫外光接触的时间来实现的，在色谱柱、流动相、梯度、流速等完全相同的条件下，uplc比普通hplc分离度要好，我曾经遇到过用uplc使用普通150mm，3.5um色谱柱开发的分析方法，在普通hplc上分离度明显下降不达标的问题。色谱峰面积变小只是一个副作用。

峰展宽和检测器没关系,是样品区带展宽,不检测一样展宽.有了检测是只是能显示出这个展宽,不能改变本质.关键还是要减小系统体积,使用小粒径柱子高流速

减小系统体积和使用小粒径柱子、高流速这些都能降低峰展宽，缩短光程也是降低峰展宽的一个手段，因为光程变短，样品流经光路的时间变短，在色谱图上表现就是色谱峰变窄

原文由 kakalhh(kakalhh) 发表:
这个是某公司优化方法视频截图，用普通流通池，小体积样品峰通过流通池时就会造成峰展宽，而换成微量流通池就好了



用普通流通池，小体积样品峰通过流通池时就会造成峰展宽，而换成微量流通池就好了

原文由 pandora98(pandora98) 发表:
图中红色管路中间的黄色线条即表示光程，对单个样品分子（或离子）而言，流速不变的情况下，其通过这段光程的时间必然是与光程长度成正比。理想状态下，色谱峰的峰宽即为最后通过光路的样品分子与最初进入光路的样品分子的保留时间之差。
光程变短，单个分子流经光路的时间变短，其吸收紫外光的能量减少；对于整个样品来说，其紫外吸收等于单个分子所吸收的紫外光的能量之和，也会相应减少，所以会有峰面积降低和峰宽减小的现象。